神经元素3过表达对诱导人脐带间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化的影响

• 作者: 孔吟皓 徐龙飞 王琪 韩晶 洪艳
• 来源期刊: 解剖学报
• 关键词: 神经元素3 脐带间充质干细胞 胰岛素分泌细胞 基因过表达 实时定量聚合酶链反应 人
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 细胞和分子生物学|Cell and Molecular Biology
• 页码范围: 398-404
• 页数: 7页
• 分类号: Q813.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.16098/j.issn.0529-1356.2021.03.011

摘要

目的 探讨神经元素3(Ngn3)的过表达能否促进人脐带间充质干细胞(HUCMSCs)向胰岛素分泌细胞(IPCs)的诱导分化.方法 分离培养HUCMSCs,流式细胞术鉴定其表面分子表达,成脂细胞、成骨细胞诱导鉴定其多向分化潜能;分阶段诱导HUCMSCs分化为IPCs,该过程包括低糖诱导和高糖诱导两阶段共21 d;实验分为两组,对照组仅进行分阶段诱导,实验组在分阶段诱导第6天感染载有目的基因Ngn3的慢病毒过表达载体,感染完成后继续诱导;电子显微镜观察诱导前、后细胞结构变化;两组细胞诱导完成后收集mRNA和蛋白质,通过Real-time PCR和Western blotting法比较诱导后两组细胞的胰岛素和肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A(Mafa)表达情况;收集诱导中后期培养基上清液,ELISA测定C肽含量.结果 成功分离HUCMSCs,细胞阳性表达CD105、CD90,阴性表达CD34、CD45,具有成脂、成骨分化能力;通过分阶段诱导将HUCMSCs向IPCs诱导,细胞阳性表达Mafa和胰岛素;实验组在诱导过程中成功过表达Ngn3;电子显微镜观察显示,实验组诱导细胞结构更为成熟;实验组IPCs胰岛素和Mafa的表达量明显高于对照组;诱导过程中实验组细胞分泌的C肽量高于对照组.结论 慢病毒介导的Ngn3过表达提高了 HUCMSCs向IPCs的诱导分化效率.