凡纳滨对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)可视化环介导等温扩增(LAMP)技术方法的优化与应用

• 作者: 葛辉 吴建绍 杨章武 吴丽云 张哲 杜秀萍 洪伟 林克冰 林琪 林嘉铭 周宸
• 来源期刊: 渔业研究
• 关键词: 传染性皮下及造血组织坏死病毒 环介导等温扩增 快速检测 对虾
• 年，卷（期）: 2021,（4）
• 所属期刊栏目: 论文与报告|Research Paper
• 页码范围: 357-365
• 页数: 9页
• 分类号: S917.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.14012/j.cnki.fjsc.2021.04.002

摘要

传染性皮下及造血组织坏死病毒(Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis vi-rus,IHHNV)作为对虾疾病的主要病原之一,能够感染多种对虾,对幼虾危害尤其明显,虽然死亡率不高,但可以引起对虾生长缓慢,造成巨大的经济损失,严重影响对虾养殖业持续健康发展.本文根据IHHNV病毒基因的保守序列,采用Primer Explorer V4软件设计6条LAMP特异性引物组合,建立了一种以环介导等温核酸扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)为基础的快速检测IHHNV的方法.对本研究的LAMP检测方法的敏感性和特异性进行分析,并将其灵敏度与实时荧光定量PCR、普通PCR检测方法进行比较.结果显示:LAMP检测方法在63℃恒温条件60 min内完成反应,阳性结果出现可视化的绿色,阴性结果颜色不发生变化;LAMP方法的最低检出限为10.3 copies/μL,灵敏度与荧光实时定量PCR相当,较常规PCR高.结果表明建立的LAMP方法适用于对虾IHHNV的现场快速检测.