miR-26a靶向EZH2在长波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞光老化中的作用机制研究

• 作者: 毛丽艳 谢一航 施辛 张婷 钱华 吴亚芬 鲁慧 胡翠 李巍
• 来源期刊: 中华皮肤科杂志
• 关键词: 成纤维细胞 紫外线 细胞衰老 微RNAs 基因，EZH2 微小RNA-26a
• 年，卷（期）: 2021,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 612-619
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.35541/cjd.20200871

摘要

目的:探讨长波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞光老化中miRNA-26a的表达情况，以及上调或下调miR-26a表达对全基因组甲基化水平、靶基因组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶2（EZH2）及细胞老化的影响。方法:以10 J/cm 2 UVA照射人皮肤成纤维细胞，分别在第0、3、7天提取RNA，实时定量反转录PCR（RT-PCR）检测miR-26a的表达；通过转染miR-26a模拟物（mimic）和miR-26a抑制物（inhibitor）上调或下调miR-26a的表达，通过荧光显微镜观察和实时定量PCR检测miR-26a表达量，并评估转染效率。将人皮肤成纤维细胞分为空白对照组（不做任何处理）、UVA组（UVA照射）、miR-26a-mimic组（转染miR-26a-mimic）、UVA+miR-26a-mimic组（转染miR-26a-mimic后UVA照射）、miR-26a-inhibitor组（转染miR-26a-inhibitor）、UVA+miR-26a-inhibitor组（转染miR-26a-inhibitor后UVA照射）。第7天完成UVA照射后，收集各组细胞，采用流式细胞仪检测细胞周期，DNA甲基化定量检测试剂盒检测全基因组甲基化水平，RT-PCR检测EZH2、DNA甲基转移酶1（DNMT1）mRNA以及miR-26a的表达，Western印迹检测EZH2以及DNMT1蛋白的表达。采用单因素方差分析及LSD- t检验进行统计学分析。 结果:随着培养时间的延长，对比空白对照组，UVA照射组中miR-26a表达量逐渐增高，在UVA照射第7天后，两组间miR-26a表达水平差异有统计学意义（ t=5.295， P < 0.05）。miR-26a mimic/miR-26a inhibitor转染HSF后，细胞内均有较高的荧光表达，提示均具有较高的转染效率。流式细胞仪检测显示，空白对照组、UVA组、miR-26a-mimic组、UVA+miR-26a-mimic组、miR-26a-inhibitor组、UVA+miR-26a-inhibitor组G1期细胞比例分别为52.82% ± 2.56%、78.56% ± 4.34%、53.63% ± 3.13%、89.52% ± 4.17%、54.39% ± 3.86%、65.34% ± 4.78%，各组间差异有统计学意义（ F=46.728， P < 0.01），其中UVA组高于空白对照组（ t=8.848， P < 0.01），UVA+miR-26a-mimic高于miR-26a-mimic组（ t=11.922， P < 0.01）和UVA组（ t=3.154， P < 0.05），UVA+miR-26a-inhibitor组高于miR-26a-inhibitor组（ t=3.087， P < 0.05），但低于UVA组（ t=3.547， P < 0.05）。全基因组甲基化水平检测显示，上述各组甲基化水平（ A450值）分别为0.676 ± 0.024、0.323 ± 0.043、0.506 ± 0.035、0.169 ± 0.024、0.602 ± 0.036、0.422 ± 0.029，各组间差异有统计学意义（ F=97.402， P < 0.01），其中UVA组低于空白对照组（ P < 0.01），UVA+miR-26a-mimic低于miR-26a-mimic组（ P < 0.01）和UVA组（ P < 0.01），UVA+miR-26a-inhibitor组低于miR-26a-inhibitor组（ P < 0.01），但高于UVA组（ P < 0.05）。RT-PCR和Western印迹显示，6组细胞间EZH2、DNMT1 mRNA和蛋白表达水平差异均有统计学意义（均 P < 0.05），其中UVA组均低于空白对照组（ P < 0.05），UVA+miR-26a mimic组均低于miR-26a mimic组（ P < 0.05）和UVA组（ P < 0.05），而UVA+miR-26a inhibitor组均低于miR-26a inhibitor组（ P < 0.05），但均高于UVA组（ P < 0.05）。 结论:在UVA照射诱导皮肤成纤维细胞光老化中，miR-26a表达上调，细胞增殖活性下降，全基因组甲基化水平降低；上调miR-26a的表达，可下调其靶基因EZH2及甲基化相关基因DMNT1的表达，促进细胞光老化，反之，下调miR-26a的表达，可上调EZH2及DNMT1的表达，抑制细胞光老化。