铁死亡在脂多糖诱导巨噬细胞损伤小鼠模型中的增强作用

• 作者: 王慧星 韩晨阳 李全波 刘靖芷 马文庭 周国明 蒋宁 史可梅
• 来源期刊: 中华疼痛学杂志
• 关键词: 铁死亡 巨噬细胞 线粒体 脂多糖类
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 论著|Original Article
• 页码范围: 242-249
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn101658-20200117-00002

摘要

目的 评价铁死亡在脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞线粒体损伤模型中的作用.方法 常规培养小鼠RAW264.7细胞,按随机数字表法将培养的细胞分为4组(n=6):对照组(Con组)、脂多糖组(LPS组)、脂多糖+铁死亡激动剂Erastin组(LPS+E组)和脂多糖+铁死亡抑素Ferrostatin-1组(LPS+F组).LPS组给予终浓度为1μg/ml的LPS进行孵育6h;LPS+E组给予终浓度为1μg/ml的LPS和浓度为1 mmol/L的含Erastin培养液进行孵育6h;LPS+F组给予终浓度为1μg/ml的LPS和浓度为1 mmol/L的含Ferrostatin-1培养液进行孵育6h.采用Clark氧电极法及JC-1法分别测定线粒体呼吸控制率(RCR)及线粒体膜电位(MMP),透射电镜下观察细胞内线粒体改变情况,采用Western blot法测定细胞内铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、长链酯酰辅酶A合成酶4(ACSL4)的表达,采用荧光探针法测定活性氧族(ROS)和Fe2+含量,采用硫代巴比妥酸(TBA)法测定丙二醛(MDA)含量.结果 与Con组比较,LPS组RCR和MMP均降低(P均＜0.05),GPX4表达下调(P＜0.05),ACSL4表达上调(P＜0.05);线粒体出现线粒体膜增厚、线粒体皱缩、线粒体嵴消失等铁死亡表现,细胞内Fe2+含量升高(P＜0.05),ROS含量升高(P＜0.05),MDA含量升高(P＜0.05).与LPS组比较,LPS+E组RCR和MMP降低(P＜0.05),GPX4表达下调(P＜0.05),ACSL4表达上调(P＜0.05),Fe2+含量、ROS含量和MDA含量均升高(P均＜0.05).LPS+F组RCR和MMP升高(P＜0.05),GPX4表达上调(P＜0.05),ACSL4表达下调(P＜0.05),出现铁死亡变化的线粒体增加(P＜0.05),Fe2+含量、ROS含量和MDA含量均降低(P均＜0.05).结论 铁死亡增强LPS致小鼠巨噬细胞线粒体损伤.