茄匍柄霉菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 谢学文 陈利达 曹金强 韩道杰 石延霞 柴阿丽 李磊 李宝聚
• 来源期刊: 植物病理学报
• 关键词: 茄匍柄霉菌 实时荧光定量PCR 湿度 病残体
• 年，卷（期）: 2021,（4）
• 所属期刊栏目: 实验方法|EXPERIMENTAL METHOD
• 页码范围: 618-625
• 页数: 8页
• 分类号: S432.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.13926/j.cnki.apps.000717

摘要

为了准确检测病残体内茄匍柄霉菌(Stemphylium solani)DNA含量在土壤内的动态变化,本研究根据三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列,设计并筛选特异性引物Stem-g7F/Stem-g7R,能从靶标基因组DNA中特异性扩增出大小为150 bp的目的片段.建立的Stemphylium solani实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测体系的灵敏度比常规PCR高1 000倍,且特异性良好.标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数为0.992.利用所建立的qRT-PCR方法对病残体进行检测发现,病残体DNA初始拷贝数为3.69×109拷贝数/g,经过温度27℃、80％湿度下处理30 d病残体DNA含量下降至1.21×106拷贝数/g,而在温度27℃、20％湿度下含量为1.29×1010拷贝数/g.因此,建立的S.solani的qRT-PCR检测体系具有特异性强、灵敏度高的特点,可以快速准确地定量检测病残体S.solani的含量,为番茄匍柄霉叶斑病的早期预防和流行监测提供有效的技术手段.