大黄素上调微小RNA-206减轻缺氧诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞损伤

• 作者: 吴坤 张建刚 孙科 朱金钊
• 来源期刊: 安徽医药
• 关键词: 大黄素 细胞低氧 miR-206 氧化应激 炎症 凋亡
• 年，卷（期）: 2021,（4）
• 所属期刊栏目: 药学研究
• 页码范围: 654-658,封3
• 页数: 6页
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨大黄素对缺氧诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞氧化应激、炎症和凋亡的作用机制.方法 2018年6月至2019年6月,用神经生长因子(NGF)处理构建缺氧PC12细胞;大黄素Emodin(2、4、6μg/mL)处理缺氧PC12细胞,筛选最适浓度4μg/mL;用脂质体法将微小RNA阴性对照(miR-con)、微小RNA-206(miR-206)、4μg/mL Emodin+抗-miR-con(anti-miR-con)、4μg/mL Emodin+抗-miR-206(anti-miR-206)转染至缺氧PC12细胞;流式细胞术、蛋白免疫印迹(Western blotting)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞的凋亡、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved-caspase-3)蛋白表达、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、人白细胞介素-1β(IL-1β)、miR-206的含量.结果 与缺氧PC12细胞(37.25±3.75)％相比,大黄素呈浓度依赖性抑制缺氧诱导的PC12细胞凋亡[(30.13±3.15)％、(13.43±1.35)％、(10.36±1.03)％];与缺氧PC12细胞相比,大黄素(4μg/mL)治疗后,细胞氧化应激因子MDA[(1.01±0.10)nmol/mg比(2.56±0.26)nmol/mg]、ROS[(186.28±18.75)比(400.25±40.07)]的表达均明显降低,SOD[(11.75±1.18)U/mg比(2.43±0.24)U/mg]的表达明显升高,炎性因子TNF-α[(4.89±0.50)ng/g比(28.76±2.88)ng/g]、IL-1β[(8.22±0.82)ng/g比(15.72±1.58)ng/g]的表达明显降低,miR-206的表达也出现明显升高(P<0.05).与hypoxia+miR-con组相比,过表达miR-206后,缺氧诱导PC12细胞中MDA[(2.58±0.27)nmol/mg比(1.01±0.10)nmol/mg]、ROS[(196.32±19.65)比(405.76±40.53)]、TNF-α[(4.56±0.50)ng/g比(28.01±2.75)ng/g]、IL-1β[(8.76±0.88)ng/g比(15.50±1.58)ng/g]的表达均显著降低,SOD[(12.04±0.12)U/mg比(2.55±2.56)U/mg]的表达显著升高,细胞凋亡率[(8.96±0.90)％比(36.25±3.63)％]显著降低,而抑制miR-206能够减弱大黄素对缺氧PC12细胞的保护作用.结论 大黄素可抑制缺氧诱导的PC12细胞凋亡,减轻细胞的氧化应激和炎性反应,其机制可能与上调miR-206相关,将可为大黄素的临床应用提供理论支持.