高糖环境下抑瘤素对人皮肤成纤维细胞增殖和细胞外基质分泌的影响

• 作者: 刘露露 符学铭 薛碧宇 薛斌
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 关键词: 抑瘤素 人皮肤成纤维细胞 高糖 细胞增殖 ERK 细胞外基质
• 年，卷（期）: 2021,（10）
• 所属期刊栏目: 基础医学|Basic Medicine
• 页码范围: 955-963
• 页数: 9页
• 分类号: R322.991|R341|R349.14
• 语种: 中文
• DOI: 10.16016/j.1000-5404.202011253

摘要

目的 探讨高糖环境下抑瘤素(oncostatin M,OSM)对人皮肤成纤维细胞(human dermal fibroblasts,HDFs)增殖和细胞外基质分泌的影响及其可能的作用机制.方法 ①高糖模型建立:人皮肤成纤维细胞分为5组,分别给予5、10、15、20、25 mmol/L葡萄糖处理;采用MTT检测高糖培养24、36、48 h各组细胞的增殖活力,Western blot检测对照组(5 mmol/L葡萄糖)和高糖组(20 mmol/L葡萄糖)细胞培养24、36、48 h后ERK、p-ERK和CyclinD1蛋白表达.②探讨OSM对高糖模型作用的最佳浓度:细胞分为5组,对照组给予20 mmol/L葡萄糖处理,其余各组分别给予20 mmol/L葡萄糖+25、50、100、200 ng/mL OSM处理;采用MTT检测各组细胞培养24、36、48 h后的增殖活力;Westem blot检测各组细胞Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、Fibronectin蛋白表达.③探讨OSM对高糖模型的作用的机制:将细胞分为对照组、高糖组、高糖+OSM组、高糖+OSM+抑制剂PD98059组.流式细胞仪测定各组细胞周期,Western blot检测ERK、p-ERK、CyclinD1、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、Fibronectin等相关因子的蛋白表达,q-PCR验证各组细胞ERK1/2、CyclinD1、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、Fibronectin基因相对表达量的差异.结果 与对照组比较,经20 mmol/L葡萄糖处理后,HDFs的增殖活力显著降低(P＜0.001),G1期细胞增多(P＜0.01),S期细胞显著减少(P＜0.01);ERK、p-ERK、CyclinD1、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、Fibronectin蛋白表达显著降低(P＜0.01,P＜0.05).与高糖组比较,100 ng/mL OSM处理高糖组48 h后,细胞的增殖活力显著增高(P＜0.001);G1期细胞减少(P＜0.05),S期细胞显著增多(P＜0.05);ERK、p-ERK、CyclinD1、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、Fibronectin的蛋白表达显著增高(均P＜0.01);q-PCR结果与Western blot结果基本一致,差异均有统计学意义(P＜0.05).当ERK通路特异性小分子抑制剂PD98059阻断ERK信号通路后,上述效应显著减弱(P＜0.05).结论 OSM可能通过ERK信号通路逆转高糖对HDFs增殖和细胞外基质分泌的抑制作用.