食品中人星状病毒的定量检测方法

• 作者: 徐蕾蕊 李丹 魏咏新 马丹 魏海燕 汪琦 张西萌 付溥博 刘莉 赵晓娟 曾静
• 来源期刊: 中国食品学报
• 关键词: 人星状病毒 定量检测 一步法反微滴数字PCR 回收率
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 分析与检测
• 页码范围: 300-308
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.16429/j.1009-7848.2021.01.036

摘要

目的:应用一步法微滴数字PCR方法(RT-ddPCR),建立一种食品中人星状病毒(HAstV)定量检测方法.方法:筛选引物探针,建立HAstV RT-ddPCR方法;利用其它常见食源性病毒RNA,确定特异性;梯度稀释HAV RNA标准样品确定检测限、准确度和重复性.用已知效价的MS2噬菌体制备人工污染样品,研究RT-ddPCR方法在不同种类食品基质中的检测限和回收率,比较2种RNA提取方法的病毒检出量.结果:HAstV RT-ddPCR方法准确度、灵敏度和重复性良好,检测限105～100拷贝/μL,最低定量限5拷贝/μL;不同种类食品基质的检测限分别为7.2×106～3600拷贝(贝类消化腺),7.2×106～3600拷贝(硬表面食品),7.2×106～7200拷贝(生食蔬菜)、7.2×107～7200拷贝(软质水果);高浓度污染剂量时,Trizol裂解结合磁珠纯化方法病毒检出量显著低于Trizol裂解提取方法(P<0.05);不同种类食品基质中模拟病毒回收率存在显著差异(P<0.05).结论:本研究建立的食品中HAstV定量检测方法可有效定量检测HAstV,可通过病毒回收率计算样品中HAstV的实际载量.