nicastrin基因沉默的斑马鱼模型构建及其色素异常机制的初步研究

• 作者: 李文锐 贾苇雪 张蕴斌 林麟 李诚让
• 来源期刊: 中华皮肤科杂志
• 关键词: 色素沉着异常 化脓性汗腺炎 Nicastrin基因 γ分泌酶 斑马鱼模型
• 年，卷（期）: 2021,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 402-407
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.35541/cjd.20200617

摘要

目的:探讨nicastrin（nct）基因对斑马鱼黑素细胞生物学功能的影响。方法:利用吗啉代寡核苷酸（MO）技术针对斑马鱼nct基因mRNA设计nct-MO序列，同时设计对照MO序列（ctrl-MO），并构建5′端为MO靶序列的增强绿色荧光蛋白（EGFP）mRNA，通过显微注射的方式将nct-MO或ctrl-MO与EGFP mRNA共注射入斑马鱼胚胎中，验证nct-MO的沉默效率，观察其表型变化。以野生型斑马鱼作为空白对照组，实时荧光定量PCR检测黑素合成notch信号通路相关基因mitfa、tyr、tyrp1a、tyrp1b、dct、pmela、notch1a、notch1b、hey1 mRNA表达水平的变化。多组间均数比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD- t检验。 结果:斑马鱼受精后8 h，ctrl-MO+EGFP mRNA组斑马鱼胚胎中均有绿色荧光表达，而nct-MO+EGFP mRNA组及空白对照组胚胎均未见绿色荧光。受精后48 h，nct-MO组幼鱼尾部色素沉着区面积占比（0.169 ± 0.083）低于ctrl-MO组（0.258 ± 0.042， t=3.202， P=0.005），且nct-MO组色素分布紊乱。实时荧光定量PCR显示，nct-MO组、ctrl-MO组、空白对照组间pmela、tyrp1a、hey1基因mRNA相对表达量差异有统计学意义（均 P < 0.05），mitfa、tyr、tyrp1b、dct、notch1a、notch1b mRNA相对表达差异无统计学意义（均 P > 0.05）；nct-MO组pmela、tyrp1a相对表达水平（0.708 ± 0.028、0.558 ± 0.136）低于ctrl-MO组（1.023 ± 0.142、1.016 ± 0.134，均 P < 0.05）。 结论:nct基因可能通过调控斑马鱼黑素合成影响黑素细胞生物学功能。