家蚕BmlncR2036调控P25基因启动子活性及参与中肠发育调控

• 作者: 霍春月 程浩 付裕 常美玲 王艺 阚云超 李丹丹
• 来源期刊: 昆虫学报
• 关键词: 家蚕 长链非编码RNA 丝素蛋白 丝腺 变态发育 中肠
• 年，卷（期）: 2021,（8）
• 所属期刊栏目: 生理生化|Physiology and Biochemistry
• 页码范围: 897-907
• 页数: 11页
• 分类号: Q522
• 语种: 中文
• DOI: 10.16380/j.kcxb.2021.08.002

摘要

[目的]长链非编码RNA (long non-coding RNA,lncRNA)对家蚕Bombyx mori发育具有重要调控作用.我们在前期研究中发现一个位于家蚕丝素蛋白基因P25附近的lncRNA BmlncR2036.本研究旨在进一步探索BmlncR2036调控家蚕P25基因表达的分子机制.[方法]qPCR检测BmlncR2036在5龄第3天家蚕幼虫不同组织(体壁、脑、神经、精巢、卵巢、丝腺、马氏管、血淋巴、脂肪体和中肠)中和不同发育阶段前丝腺、中丝腺和后丝腺中的表达谱.预测能够同时靶向P25和BmlncR2036的miRNA,利用荧光素酶检测法验证miRNA与P25互作关系.荧光素酶检测法测定BmlncR2036对P25基因启动子转录活性的影响.在家蚕5龄第3天幼虫中注射dsRNA敲低BmlncR2036的表达,观察丝腺及中肠表型的变化.[结果]qPCR结果显示,BmlncR2036在家蚕5龄第3天幼虫和5龄熟蚕的后丝腺中高表达,与P25基因呈现一致的表达趋势;BmlncR2036在家蚕5龄第3天幼虫的精巢和中肠中高表达,在其他组织中表达量较低,暗示其功能的多样性.miR-2739和miR-279a既能够与BmlncR2036匹配,也可能靶向P25基因的3'UTR.但荧光素酶检测法结果显示P25不是miR-2739和miR-279a的真实靶标.BmlncR2036负调控P25启动子活性,共转染pcDNA3.1(+)[BmlncR2036]和pGL3-Enhancer[P25-promoter J载体后,细胞荧光素酶活性极显著下降了52％.在家蚕5龄第3天幼虫中敲低BmlncR2036表达后出现体色变暗,中肠残留大量内容物,直至死亡的现象,表明BmlncR2036可能参与家蚕中肠的发育调控.[结论]发现lncRNA BmlncR2036可调控P25基因启动子活性,还可能参与调控家蚕中肠的发育.本研究为进一步探索家蚕lncRNA的功能提供了实验依据.