琉璃苣BoD6D载体的构建及转化

• 作者: 巩元勇 赵丽华 闫飞 郭书巧 束红梅 倪万潮
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 琉璃苣 BoD6D γ-亚麻酸 酵母表达载体 植物表达载体
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 227-232
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2020-0791

摘要

运用植物基因工程手段构建琉璃苣BoD6D转化载体,为提高油料作物油份中γ-亚麻酸含量奠定基础.以琉璃苣基因组DNA为模板克隆BoD6D,构建酵母表达载体并转化酿酒酵母,对酵母进行诱导表达,提取脂肪酸后进行甲酯化反应,利用气相色谱分析脂肪酸含量;同时构建植物双元表达载体,经农杆菌介导通过蘸花法转化拟南芥,最后对转基因拟南芥通过抗性筛选及PCR进行鉴定.结果 表明,BoD6D编码区不舍有内含子,可以直接用于后续的功能研究;成功构建了酿酒酵母表达载体pYES2-BoD6D,气相色谱检测结果表明BoD6D在酵母中能够成功的将亚油酸催化生成γ-亚麻酸;成功构建了植物双元表达载体pBI121-BoD6D,卡那霉素抗性筛选和PCR鉴定结果表明已经成功获得BoD6D的拟南芥转化植株.通过以琉璃苣基因组DNA为模板比较方便的获得有功能的BoD6D用于转基因植物研究.