可溶性TCR蛋白复合物原核表达与纯化的研究

• 作者: 汤磊 李梦媛 蒋小猛 郭薇
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: T细胞受体 复性 表达纯化 包涵体 异二聚体 还原、非还原型SDS-PAGE电泳
• 年，卷（期）: 2021,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 441-445
• 页数: 5页
• 分类号: Q51
• 语种: 中文
• DOI: 10.19526/j.cnki.1005-8915.20210501

摘要

T细胞受体(T cell receptor,TCR)是通过二硫键连接α链和β链或者γ链和δ链的异二聚体蛋白复合物.本研究使用原核系统体外分别表达两条单链,摸索并确定快速获得一定量的TCR蛋白的复性条件,实验发现TRA、TRB蛋白变性液按照2∶1 (mg/mg)的比例混合均匀后缓慢滴加到4℃搅拌的复性液(50 mmol/L Tris、0.4 mol/L L-精氨酸、5 mol/L脲、5mmol/L EDTA、10 mmol/L还原型谷胱甘肽、2mmol/L氧化型谷胱甘肽,pH =7.6)中复性24h,使用HitrapTM CaptoTM Q初步分离纯化,去除部分不溶性及等电点相差较大的杂质蛋白,SuperdexTM 75 Increase 10/300 GL进一步精细分离获得纯度在90％以上的TCR复合物蛋白.实验通过还原型和非还原型电泳及Western blot对纯化后的TCR蛋白进行分子量及空间结构鉴定,证明了TCR二聚体的原核表达与纯化的技术可行性.该研究为后续快速获得高纯度且正确折叠的TCR蛋白、进一步研究其功能和结构打下了夯实的基础.