新型鹅星状病毒RT-PCR检测方法的建立及初步应用

• 作者: 余明兴 林裕胜
• 来源期刊: 福建农业学报
• 关键词: 新型鹅星状病毒 RT-PCR 检测
• 年，卷（期）: 2021,（6）
• 所属期刊栏目: 动物科学|Crop Science
• 页码范围: 665-669
• 页数: 5页
• 分类号: S852.62
• 语种: 中文
• DOI: 10.19303/j.issn.1008-0384.2021.06.007

摘要

[目的]建立一种新型鹅星状病毒(New goose astrovirus,NGAstV)的RT-PCR检测方法.[方法]根据ORF2基因序列,利用Oligo 7软件设计并筛选出特异性扩增引物,通过优化扩增条件,建立检测新型鹅星状病毒的RT-PCR方法,对其进行特异性及敏感性检验,并在临床上进行初步应用.[结果]RT-PCR最佳反应体系为:Premix 10μL,ORF2上下游引物浓度10μmol·L-1各1μL,模板3μL,无菌去离子水补足至20μL.最佳反应程序为:94℃2 min;94℃30 s、55℃15 s、72℃15 s,30个循环;72℃10 min.该方法对新型鹅星状病毒能扩增出特异性片段,对其他鹅常见病原无特异性扩增;检测灵敏度为62 fg·μL-1.对45份临床样品进行检测,结果检测出15份阳性样品,阳性率为33.33％.[结论]建立的新型鹅星状病毒RT-PCR方法特异性强、稳定性好,可作为新型鹅星状病毒快速检测和流行病学调查的实用技术.