鸡骨骼肌卫星细胞的分离培养与鉴定

• 作者: 戴巍 宋瑞龙 张远浩 邹辉 顾建红 袁燕 卞建春 刘学忠
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 关键词: 骨骼肌卫星细胞 分离 培养 诱导分化 鉴定
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 遗传育种|ANIMAL GENETICS AND BREEDING
• 页码范围: 676-682
• 页数: 7页
• 分类号: S831.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2021.03.011

摘要

旨在建立鸡骨骼肌卫星细胞(muscle satellite cell,MSC)体外分离、培养、纯化、诱导分化及鉴定的方法.选取12胚龄SPF鸡胚,综合松散肌肉纤维和游离纤维基质层细胞等原理,对分离细胞使用的酶以及后续的细胞纯化、诱导分化方法进行优化;并从形态学、细胞分化能力、生长曲线、免疫荧光、RT-PCR等方面对MSC进行鉴定,从而提出一种鸡骨骼肌卫星细胞的混合酶消化分离培养方法.结果表明,刚分离纯化后的细胞折光性强,24 h贴壁展开后呈纺锤状;待诱导分化后能形成排列整齐的多核肌管;CCK-8测定细胞生长曲线呈典型的"S"型;优化后,细胞存活率为(90.82±1.294)％,细胞纯度为(90.44±1.264)％;免疫荧光检测标志性基因Pax7、Desmin表达阳性;RT-PCR检测标志性基因Pax7、MyHC、MyoD1呈阳性;并且分化前标志性基因Pax7表达量是分化后的1.705倍,分化后期标志性基因MyHC表达量是分化前的13.073倍.该试验建立了一种快速简便的鸡骨骼肌卫星细胞的体外培养方法,为研究鸡骨骼肌细胞生物学机制、肉鸡品种优化、细胞移植修复提供良好的细胞模型.