猪类无精症缺失基因DAZL的cDNA全长克隆、组织表达和亚细胞定位

• 作者: 王配 王丽娜 霍海龙 张霞 赵筱 王雪飞 霍金龙
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 关键词: 版纳微型猪近交系 类无精症缺失基因(DAZL) 基因克隆 cDNA末端快速克隆(RACE) 组织表达 亚细胞定位
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 生物技术与繁殖|ANIMAL BIOTECHNOLOGY AND REPRODUCTION
• 页码范围: 683-692
• 页数: 10页
• 分类号: S828.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2021.03.012

摘要

旨在获得猪类无精症缺失基因DAZL cDNA全长序列,阐明该基因的序列、mRNA组织表达模式、蛋白质结构特征及亚细胞定位情况.本研究以版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line,BMI)10月龄成年公猪为研究对象,屠宰收集组织样,利用RACE和RT-PCR技术获得DAZL基因cDNA全长序列;使用实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测其mRNA多组织表达谱;在线分析蛋白质的结构特点和保守结构域;用体外细胞转染技术鉴定其在ST猪睾丸细胞中的定位.结果表明,BMI DAZL cDNA全长2 985 bp(KU705632),包含888 bp的CDS区,编码295个氨基酸(AOC89050);该基因位于猪13号染色体,含11个外显子.qPCR结果显示,DAZL mRNA在睾丸中特异高表达.生物信息学分析表明,猪DAZL蛋白含有哺乳动物RMP和DAZ同源区,无规则卷曲在二级结构中超过50％.进化分析表明,BMI DAZL氨基酸序列高度保守,与牛科的亲缘关系最为接近.pEGFP-C1-DAZL转染ST细胞后的荧光共定位结果显示,DAZL蛋白主要分布在细胞核中.本研究分别从DNA、mRNA和蛋白质层面阐明了 BMI DAZL基因的序列特征、表达、蛋白质结构和定位,为进一步研究DAZL在BMI精子发生方面的功能奠定基础.