鉴别检测非洲猪瘟野毒株和基因缺失疫苗株的三重荧光PCR的建立

• 作者: 林彦星 史卫军 曹琛福 黄超华 曾少灵 吴江 徐鹏 花群义
• 来源期刊: 病毒学报
• 关键词: 非洲猪瘟病毒(ASFV) 基因缺失疫苗 荧光PCR 鉴别 检测
• 年，卷（期）: 2021,（5）
• 所属期刊栏目: 动物病毒研究论著|Animal Virus Articles
• 页码范围: 1119-1127
• 页数: 9页
• 分类号: S852.659.51
• 语种: 中文
• DOI: 10.13242/j.cnki.bingduxuebao.004040

摘要

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(African swine fever,ASFV)引起的猪的一种急性、高度接触性传染病.本研究根据ASFV B646L、MGF360-14L和CD2v基因设计了 3套引物和探针,建立了可同时鉴别检测ASFV野毒株和基因缺失疫苗株的三重荧光PCR方法.结果表明,该法特异性强,可同时检测ASFV B646L、MGF360-14L和CD2v基因,与猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒、猪A型塞内卡病毒等无交叉反应;两份ASFV MGF360-505R与CD2v基因联合缺失疫苗株DNA三重荧光PCR法检测结果都仅出现一条B646L扩增曲线,与预期一致;灵敏度高,该法对重组质粒pUC-B646L、pUC-360-14L和pUC-CD2v的检出限分别为1.572×103拷贝/mL、1.934×103拷贝/mL 和 1.929×103拷贝/mL,灵敏度比世界动物卫生组织(World organization for animal health,OIE)推荐的荧光PCR高10倍;重复性好,对三种重组质粒检测的Ct值批内和批间变异系数均小于2％;应用该法及OIE推荐的荧光PCR对1 215份样品进行平行检测,结果显示23份样品为阳性,1 192份样品为阴性,两种方法检测结果一致.本研究建立的方法能鉴别检测ASFV野毒株和基因缺失疫苗株(缺失MGF360-505R和/或CD2v基因),对将来基因缺失疫苗的推广应用及ASF疫情防控具有重要的意义.