栉孔扇贝鳃细胞原代培养与Bα]P细胞毒性检测技术的研究

• 作者: 张子仙 田依萌 刘志 潘鲁青
• 来源期刊: 渔业科学进展
• 关键词: 栉孔扇贝 鳃细胞 原代培养 B[α]P 细胞毒性
• 年，卷（期）: 2021,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 105-112
• 页数: 8页
• 分类号: Q954.6|X174
• 语种: 中文
• DOI: 10.19663/j.issn2095-9869.20200421001

摘要

本研究优化了栉孔扇贝(Chlamys farreri)鳃细胞制备方法和原代培养条件,采用3种细胞活性检测技术,比较分析了苯并(a)芘(B[α]P)对栉孔扇贝鳃细胞的毒性作用.结果显示,栉孔扇贝鳃组织在1％青霉素–链霉素(双抗)和庆大霉素消毒10～30 min内,原代培养鳃细胞存活率无明显差异.消毒30 min时,镜检无染菌现象,细胞状态良好.胰蛋白酶消化时间对鳃细胞收获量影响显著,在消化15～25 min内,鳃细胞存活率较高,胰蛋白酶的最佳消化时间为25 min.在150～300 g相对离心力作用下,鳃细胞形态和存活率存在明显差异,在150 g时,存活率和细胞完整性较好.添加胎牛血清(5％～20％)在6～12 h内鳃细胞存活率无显著变化,培养24 h时,5％和20％处理组存活率显著下降,10％和15％处理组存活率无明显变化.台盼蓝拒染法细胞活性检测表明,B[α]P对栉孔扇贝鳃细胞活性无明显影响;CCK8试剂法得出,仅在16μg/mL最高浓度下,鳃细胞活性受到显著抑制;而中性红比色法显示,鳃细胞毒性作用与B[α]P浓度、染毒时间呈正相关性.研究表明,栉孔扇贝鳃细胞最佳制备方法:消毒30 min、胰蛋白酶消化25 min、相对离心力为150 g、原代培养基添加10％胎牛血清为最佳.同时,中性红比色法可以作为评价B[α]P对栉孔扇贝鳃细胞毒性的敏感指标.