细胞外信号调节激酶/c-Jun氨基末端激酶在炭黑诱导的人胚肺成纤维细胞毒性中对激活蛋白-1信号通路的作用

• 作者: 康宁 张夏男 刘凯 钱源源 戴宇飞 宋佳阳 郑玉新 叶萌
• 来源期刊: 卫生研究
• 关键词: 炭黑 细胞外信号调节激酶 c-Jun氨基末端激酶 激活蛋白-1 人胚肺成纤维细胞
• 年，卷（期）: 2021,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 533-538
• 页数: 6页
• 分类号: R114|R135.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.19813/j.cnki.weishengyanjiu.2021.04.001

摘要

目的 探讨细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK)/c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinases,JNK)在炭黑诱导的人胚肺成纤维细胞(human embryonic lung fibroblasts,HELF)毒性中对激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)信号通路的作用.方法 分别在含0、15、30、60、120和240 μg/mL炭黑的RPMI 1640培养液中培养HELF细胞24 h,用噻唑蓝比色法确定炭黑致HELF细胞毒性的剂量.100 μg/mL炭黑分别处理HELF细胞(CB)、转染ERK显性失活突变体质粒(DN-ERK)HELF细胞(CB-DN-ERK)、转染JNK显性失活突变体质粒(DN-JNK)HELF细胞(CB-DN-JNK),同时设立细胞不做任何处理的对照组.CB组在染毒0、1、2、4、8、12、24和36 h 用 Western blot 实验检测 ERK、JNK、p38、c-Jun、c-Fos 及其磷酸化水平,用荧光素酶法检测其AP-1活性.CB-DN-JNK和CB-DN-JNK组在染毒24h用荧光素酶法检测AP-1活性,用Western blot实验检测ERK、JNK、c-Jun、c-Fos及其磷酸化水平.结果 CB组ERK和p-ERK蛋白表达水平在1～36 h各时间点均大于0h时,而p38蛋白在1～36h各时间点均小于0h时;AP-1活性在8h时下调至最低(0.72±0.12),在36 h 时则上调至峰值(1.38±0.11);c-Fos、p-c-Fos、c-Jun蛋白表达水平在染毒1～24 h各时间点均大于0 h时,且p-c-Jun蛋白表达水平在1、2、4、8和36 h也大于0 h时.CB组AP-1活性,以及ERK、JNK、p38、c-Fos及其磷酸化蛋白水平变化呈双相模式.与CB组HELF细胞相比,虽然CB-DN-ERK组(1.02±0.04)及CB-DN-JNK组(1.09±0.10)AP-1活性差异均无统计学意义(分别为:t =0.16,P= 0.88;t= 0.73,P = 0.50),但 CB-DN-JNK 组 c-Fos(t= 5.31,P = 0.01)、p-c-Fos(t = 4.33,P = 0.01)、p-c-Jun(t= 10.95,P＜0.01),以及 CB-DN-ERK 组 c-Fos 蛋白表达水平(t = 42.72,P＜0.01)均显著降低.结论 在炭黑诱导HELF细胞ERK、c-Jun、c-Fos及其磷酸化蛋白表达水平增高过程中,JNK正调控c-Fos、p-c-Fos、p-c-Jun蛋白表达水平,ERK正调控c-Fos蛋白表达水平.