香菇微卫星标记变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的应用及正交优化

• 作者: 张丹 颜梦秋 张美彦 谭琦 宋春艳 尚晓冬
• 来源期刊: 江苏农业科学
• 关键词: 香菇 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 微卫星标记 正交试验设计 银染试验
• 年，卷（期）: 2021,（5）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 57-61
• 页数: 5页
• 分类号: S646.1+20.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.15889/j.issn.1002-1302.2021.05.010

摘要

变性聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种高效鉴定微卫星分子标记的方法,广泛应用于种质鉴定、遗传连锁图谱构建及分子标记辅助育种等研究中.该方法由于操作繁琐,目前在食用菌领域的应用尚不广泛.以香菇为研究对象,建立变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的检测流程,并利用正交试验对检测流程中涉及的加样缓冲液与PCR反应液的体积比、95℃变性时间、置于冰上冷却时间、银染时间、银染后胶板去离子水洗时间等5个操作节点进行优化.结果表明,加样缓冲液与PCR反应液体积比为1∶2,95℃变性2～5 min,置于冰上冷却15～20 min,银染7 min,银染后胶板用去离子水洗5～10 s是正交试验的较优处理组合.试验建立了香菇微卫星标记变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测操作规程,该操作规程具有成本低、效率高、易批量化操作等优点,对其他食用菌微卫星标记的应用具有重要的参考价值.