鹿流行性出血热病毒核心样颗粒的制备与鉴定

• 作者: 黄超华 花群俊 吴江 曹琛福 林彦星 史卫军 林永涛 曾少灵 杨俊兴 花群义
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 关键词: 鹿流行性出血热病毒 VP3蛋白 VP7蛋白 核心样颗粒
• 年，卷（期）: 2021,（8）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1023-1028
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0141

摘要

为制备鹿流行性出血热病毒(EHDV)的核心样颗粒(CLPs),本研究将鹿流行性出血热病毒(EHDV)L3与S7基因片段插入至昆虫杆状病毒穿梭载体pFastBac-Dual中,构建重组质粒pFastBac-Dual-vp3-vp7,并通过转座获得重组杆状病毒质粒Bacmid-vp3-vp7,随后转染Sf9细胞获得重组杆状病毒rBac-vp3-vp7.通过重组杆状病毒感染Sf9细胞共表达VP3和VP7蛋白,并利用蔗糖梯度离心进行纯化,两者组装形成CLPs.负染后通过透射电镜观察纯化产物的形态,Western-blotting验证其反应原性,免疫小鼠检验其免疫原性.结果 显示,透射电镜下可以观察到纯化产物中合有大量的与EHDV形态相似的直径为60～70 nm的中空颗粒;以绵羊EHDV阳性血清为一抗的Western-blotting可以检测到大小分别为100 ku和38 ku的2条蛋白条带,分别与EHDV VP3和VP7蛋白大小一致;间接ELISA结果显示,3次免疫后可刺激产生的EHDV特异性抗体效价可达1∶12800.上述结果表明,本研究获得了具有典型形态、良好反应原性和免疫原性的EHDV核心样颗粒(CLPs).