核因子-κB配体的受体在Wnt/β-连环蛋白通路促成骨样细胞转化中的作用及意义

• 作者: 杨明 聂斌 范文娟 钟秋英 李寒 王博 张超 管思明 刘婕 李莎莎
• 来源期刊: 中华实验外科杂志
• 关键词: 动脉钙化 Wnt/β-catenin通路 成骨样细胞 骨保护素
• 年，卷（期）: 2021,（7）
• 所属期刊栏目: 骨外科
• 页码范围: 1202-1205
• 页数: 4页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn421213-20201109-00821

摘要

目的:探讨核因子(NF-κB)配体的受体在Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路促成骨样细胞转化中的作用及其意义。方法:分离健康雄性远交群(SD)大鼠主动脉平滑肌细胞(SMC)并诱导为成骨样细胞，分别用LiCl、LiCl+OPG(0.1 ng/ml)、LiCl+OPG(1.0 ng/ml)、LiCl+OPG(10.0 ng/ml)、LiCl+OPG(100.0 ng/ml)处理成骨样细胞，对照组未行LiCl及OPG处理，LiCl浓度均为20 mmol/L。RT-qPCR检测各组细胞OPG、RANKL转录水平；Von Kossa染色，钙离子含量测定，碱性磷酸酶(ALP)活性测定，骨钙素蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞钙化程度；免疫组织化学和Western blot检测Wnt/β-catenin通路激活情况。采用单因素方差分析，组内进一步两两比较采用LSD- t检验，两两比较采用 t检验。 结果:LiCl组OPG的表达(4.35±0.88)稍高于成骨样细胞组(4.12±0.82， t＝0.603， P>0.05)，RANKL表达则LiCl组(2.61±0.42)显著高于成骨样细胞组(1.52±0.35， t＝2.317， P<0.05)；OPG/RANKL的比值LiCl(1.67±0.41)组显著低于成骨样细胞组(2.71±0.48， t＝2.542， P<0.05)。成骨样细胞的转化实验中，成骨样细胞组及加LiCl+OPG的4组钙离子含量、ALP活性、骨钙素的水平(25.2±5.8、68.5±13.3、61.1±12.8、57.6±11.3、56.3±11.4)、(80.4±10.2、141.2±17.6、125.7±15.3、123.5±15.9、122.7±15.1)、(0.61±0.10、0.82±0.14、0.79±0.13、0.72±0.12、0.73±0.13)均低于LiCl组(99.5±16.5)、(186.0±39.3)、(0.98±0.15)，( t＝5.971、2.795、2.810、2.829、2.831， P<0.05)、( t＝5.623、2.597、2.765、2.791、2.793， P<0.05)( t＝4.931、2.379、2.384、2.391、2.392， P<0.05)；加LiCl+OPG的4组中钙离子含量、ALP活性、骨钙素的水平差异无统计学意义( P>0.05)，均高于成骨样细胞组水平( t＝5.362、2.769、2.635、2.633， P<0.05)、( t＝5.105、2.758、2.732、2.733， P<0.05)、( t＝2.762、2.569、2.566、2.563， P<0.05)。Wnt/β-catenin通路的激活程度检测中，β-catenin的表达水平β-catenin表达水平LiCl组(1.75±0.26)高于成骨样细胞组及加LiCl+OPG的4组(1.32±0.18、1.25±0.17、1.25±0.16、1.22±0.16)，( t＝4.442、2.650、2.654、2.712、2.709， P<0.05)、加LiCl+OPG的4组高于成骨样细胞组( t＝2.492、2.455、2.439、2.437， P<0.05)，加LiCl+OPG的4组之间比较差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:激活Wnt/β-catenin通路促进成骨样细胞转化的机制，有RANKL依赖性，也有非RANKL依赖性。