免疫亲和层析柱纯化大豆球蛋白多克隆抗体的研究

• 作者: 姚利利 席俊 陈慧彬 陈阳 皮江一 李潘
• 来源期刊: 中国食品学报
• 关键词: 多抗血清 亲和层析 纯化
• 年，卷（期）: 2021,（6）
• 所属期刊栏目: 分析与检测|Analysis and Detection
• 页码范围: 296-300
• 页数: 5页
• 语种: 中文
• DOI: 10.16429/j.1009-7848.2021.06.035

摘要

为了得到纯度高、特异性好的抗大豆球蛋白多克隆抗体,用溴化氢活化的琼脂糖4B纯化经硫酸铵分级沉淀后的抗体,此免疫亲和层析过程节省时间且操作简单.经凝胶过滤层析的大豆球蛋白,溶胀后的填料与大豆球蛋白配基以共价键的形式连接,利用抗原抗体特异性结合的特点,杂蛋白随流动相流出,再利用洗脱液将抗大豆球蛋白的目标抗体特异性地洗脱下来,用紫外检测仪检测非特异性洗脱峰和特异性洗脱峰.通过SDS-PAGE鉴定,多抗血清中的其它蛋白组分被非特异性洗脱掉,经浓度测定,特异性洗脱的蛋白质量浓度为0.3 mg/mL,间接ELISA显示,纯化后血清稀释128倍后显示为阳性.间接竞争ELISA测定抗体特异性结果显示抗体特异性得到提高.抗体被成功纯化,为加工破坏大豆球蛋白致敏性亚分子结构定位奠定基础,从而促进低致敏性食品的研发.