摘要:
目的 观察舒芬太尼丙泊酚静脉复合麻醉对骨髓间充质干细胞移植治疗创伤性脑损伤大鼠的影响.方法 取3周龄幼鼠若干,体外分离、培养骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells)稳定传代3次备用.将45只受试大鼠随机分为对照组、干细胞治疗组及联合治疗组,每组15只.采用电子颅脑损伤仪(electric cortical contusion impactor,eCCI)建立颅脑损伤(traumatic brain inj ury,TBI)大鼠模型,造模完成后尾静脉给予干细胞治疗组干细胞悬液0.5 mL(1×105/mL),联合治疗组给予干细胞的同时尾静脉注射舒芬太尼0.5 g/kg和丙泊酚2.0 mg/kg,对照组给予等量生理盐水.神经功能评分用于判定治疗过程中大鼠神经损伤程度;HE染色观察大鼠脑组织病理学变化;干湿比重法、光谱扫描仪及酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbene assay,ELISA)用于检测脑水含量、总钙含量及血清S100β含量变化;TUNEL法检测脑组织神经细胞凋亡情况,Western blot用于检测凋亡相关蛋白表达;qRT-PCR与免疫组化检测脑部炎性因子表达水平及分布.结果 1:2传代后细胞呈放射状或旋涡状集落生长趋势,细胞形态随传代次数增加逐渐稳定均一,最终稳定生长为梭形成纤维细胞样.TBI造模结束后治疗3 d内,3组mNSS评分差异无统计学意义(P>0.05);治疗7 d后,联合治疗组mNSS评分显著低于对照组;治疗14 d、21 d后干细胞治疗组及联合治疗组评分均显著低于对照组,联合治疗组低于干细胞治疗组(P<0.05).干细胞治疗组与联合治疗组海马组织较对照组病理学变化显著改善,且联合治疗组脑组织神经细胞密度显著恢复,海马区细胞排列整齐,细胞核完整且着色较浅,较干细胞治疗组治疗效果更佳.干细胞治疗组及联合治疗组脑组织水含量、总钙含量及血清S100β含量均低于对照组,联合治疗组低于干细胞治疗组(P<0.05).干细胞治疗组、联合治疗组脑组织细胞凋亡数目及Caspase-3、Bax、Cytc蛋白表达量低于对照组,联合治疗组低于干细胞治疗组,干细胞治疗组、联合治疗组Bcl-2蛋白表达高于对照组,联合治疗组高于干细胞治疗组(P<0.05).干细胞治疗组、联合治疗组IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA表达水平均低于对照组,联合治疗组低于干细胞治疗组(P<0.05).结论 舒芬太尼丙泊酚静脉复合麻醉联合骨髓间充质干细胞可减少大鼠脑水含量、总钙含量及血清S100β积聚,抑制神经细胞凋亡及炎性因子表达,加快创伤性脑损伤大鼠神经功能恢复.