蜜蜂克什米尔病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立和评价

• 作者: 张体银 邵碧英 林素洁 郑腾 王武军 张志灯
• 来源期刊: 病毒学报
• 关键词: 蜜蜂克什米尔病毒 实时荧光RT-PCR 检测方法
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 昆虫病毒研究论著|Insect Virus Articles
• 页码范围: 678-685
• 页数: 8页
• 分类号: S895.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.13242/j.cnki.bingduxuebao.003937

摘要

蜜蜂克什米尔病毒(Kashmir bee virus,KBV)是一种高毒力的急性蜜蜂病毒,可以引起蜜蜂的死亡和蜂群崩溃.本研究旨在建立一种灵敏、快速检测KBV的TaqMan实时荧光RT-PCR检测方法.参照GenBank中polymerase polyprotein有关基因序列,设计一组特异性引物和探针,并通过体外转录法制备RNA标准品作为阳性模板.在对反应体系进行优化的基础上,建立了 KBV的实时荧光RT-PCR检测方法并进行了特异性试验、敏感性试验、重复性试验和临床样本验证.结果显示:该方法能有效扩增8×100拷贝/μL～8×107拷贝/μL 的KBV标准品,建立的标准曲线呈现良好的线性关系.该方法的检测灵敏度为8拷贝/μL,对其他蜜蜂病毒不发生交叉反应,具有很好的特异性;重复性试验结果显示组内和组间的变异系数分别低于1％和2％,重复性良好.应用本研究建立方法与常规RT-PCR方法对样品进行检测,TaqMan实时荧光RT-PCR检测方法的特异性优于常规RT-PCR.本研究建立的实时荧光RT-PCR检测具有良好的敏感性、特异性和重复性,为KBV的检测和流行病学调查提供技术支持.