抗副溶血弧菌OMPK单克隆抗体的制备及其ELISA双抗体夹心检测方法建立

• 作者: 王晓瑞 邱红玲 王寿利 朱海华 周莉 平洋 谭静 王永 王慧
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 工学
• 关键词: 副溶血弧菌 弧菌外膜蛋白K 单克隆抗体 间接夹心ELISA
• 年，卷（期）: 2021,（4）
• 所属期刊栏目: 安全检测
• 页码范围: 319-325
• 页数: 7页
• 分类号: TS207.4
• 语种: 中文

摘要

制备全长和截短的弧菌外膜蛋白K(outer membrane protein K,OMPK),纯化后的OMPK免疫6～8周雌性BALB/c小鼠,间接夹心酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测小鼠的血清效价,结果表明全长OMPK重组蛋白制备的血清效价是截短OMPK1重组蛋白制备血清效价的128倍.通过全长的OMPK重组蛋白制备多株用于检测副溶血弧菌的单克隆抗体,用生物素(biotin)和辣根过氧化物酶对单克隆抗体进行标记.间接夹心ELISA实验结果表明:只有VP3-biotin和VP16-biotin与其他单克隆抗体配对检测不同的副溶血弧菌菌株表现出较高的灵敏度及良好的特异性,并且在检测其他种属20株菌时无交叉反应.VP16(Fab)-biotin/VP3检测副溶血弧菌时较VP16-biotin/VP3具有更高的灵敏度,该方法用于检测海鲜样品时,VP16-biotin/VP3检测三文鱼(5～10 CFU/25 g)和血蚶样品为副溶血弧菌阳性.本研究开发了一种快速、灵敏、简便的副溶血弧菌间接夹心ELISA检测方法.