组蛋白脱乙酰酶6抑制剂Tubastatin A对人皮肤成纤维细胞增殖和运动的影响及其分子机制

• 作者: 张灿 张琼 张均辉 王凡 张家平
• 来源期刊: 中华烧伤杂志
• 关键词: 细胞增殖 细胞运动 组蛋白脱乙酰酶6 Tubastatin A 人皮肤成纤维细胞 胞外信号调节激酶1/2
• 年，卷（期）: 2021,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 853-859
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn501120-20200519-00274

摘要

目的:探讨组蛋白脱乙酰酶6（HDAC6）抑制剂Tubastatin A对人皮肤成纤维细胞（HSF）增殖及运动性的影响及其可能的分子机制。方法:采用实验研究方法。取对数生长期HSF，按随机数字表法分为阴性对照组及1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组。阴性对照组加入含终体积分数0.1%二甲基亚砜的DMEM培养液（以下简称完全培养液），其余3组分别加入含相应终物质的量浓度Tubastatin A的完全培养液。常规培养24 h后，采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法和5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷（EdU）染色检测细胞增殖活力；在活细胞工作站下观察细胞3 h内运动范围，计算细胞曲线运动速度；采用蛋白质印迹法检测胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）及磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）的蛋白表达量，并计算p-ERK1/2与ERK1/2比值，以此表示ERK1/2活性。CCK-8法行细胞增殖活力检测样本数为6，其余实验样本数为3。对数据行单因素方差分析及LSD检验。结果:培养24 h后，CCK-8法和EdU染色显示，与阴性对照组比较，1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞增殖活力均显著下降（ P<0.01）。培养24 h后，CCK-8法显示，与1 μmol/L Tubastatin A组比较，10 μmol/L Tubastatin A组细胞增殖活力显著下降（ P<0.05）；EdU染色显示，与1 μmol/L Tubastatin A组比较，5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞增殖活力显著下降（ P<0.05或 P<0.01）。观察3 h内，1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞运动范围较阴性对照组明显缩小。观察3 h内，阴性对照组细胞曲线运动速度为（0.780±0.028）μm/min，明显快于1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞的（0.594±0.023）、（0.469±0.028）、（0.391±0.021）μm/min（ P<0.01）；1 μmol/L Tubastatin A组细胞曲线运动速度明显快于5 μmol/L Tubastatin A组和10 μmol/L Tubastatin A组（ P<0.01）；5 μmol/L Tubastatin A组细胞曲线运动速度明显快于10 μmol/L Tubastatin A组（ P<0.05）。培养24 h后，与阴性对照组比较，1 μmol/L Tubastatin A组、5 μmol/L Tubastatin A组、10 μmol/L Tubastatin A组细胞ERK1/2的活性显著下降（ P<0.01）；与1 μmol/L Tubastatin A组比，5 μmol/L Tubastatin A组和10 μmol/L Tubastatin A组细胞ERK1/2的活性显著下降（ P<0.01）；与5 μmol/L Tubastatin A组比较，10 μmol/L Tubastatin A组细胞ERK1/2的活性显著下降（ P<0.05）。 结论:HDAC6抑制剂Tubastatin A可能通过抑制ERK1/2活性，从而抑制HSF增殖及运动。