葡萄E3泛素酶HOS1基因克隆、表达及抗血清制备

• 作者: 俞沁含 焦淑珍 吴楠 张宁波 徐伟荣
• 来源期刊: 园艺学报
• 关键词: 葡萄 HOS1 原核表达 多克隆抗体 低温胁迫 表达模式分析
• 年，卷（期）: 2021,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告|Research Notes
• 页码范围: 1173-1182
• 页数: 10页
• 分类号: S663.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.16420/j.issn.0513-353x.2020-0557

摘要

HOS1(High expression of osmotically responsive genes 1)编码 1 个具有 E3泛素连接酶活性的蛋白,是模式植物拟南芥冷反应信号转导途径的关键负调控因子,但其在多年生葡萄属植物中参与低温胁迫应答的分子机制尚不明确.以欧洲酿酒葡萄品种'霞多丽'的叶片为供试材料,克隆了VvHOS1基因,其全长2 931 bp,编码976个氨基酸,在第74～106个氨基酸处存在RING类型的锌指结构域(zf-C3H4_3).系统发育分析表明,葡萄属植物的HOS1蛋白与番茄、烟草、茶树的亲缘关系最近.将VvHOS1抗原表位丰富肽段(1～320 aa)构建至原核表达载体pET28a-SUMO的BamHⅠ与HindⅢ位点,转化大肠杆菌.经IPTG诱导发现,pET28a-VvHOS11-320在大肠杆菌Rosetta(DE3)中高表达,融合蛋白主要以包涵体形式存在.将纯化后的重组蛋白作为抗原免疫大耳白兔,获得anti-VvHOS1多克隆抗体,ELISA检测效价为1 ∶ 51 200,具有较强的Western特异性.该抗血清能够特异性检测'霞多丽'葡萄叶片中的VvHOS1蛋白.(4℃)低温胁迫6、36与48 h时VvHOS1上调表达显著.