冬瓜均一化酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

• 作者: 陈凤 闫晋强 李梅兰 江彪
• 来源期刊: 广东农业科学
• 关键词: 冬瓜 DSN均一化 cDNA文库 酵母文库
• 年，卷（期）: 2021,（8）
• 所属期刊栏目: 园艺林学|Horticulture & Forestry
• 页码范围: 58-64
• 页数: 7页
• 分类号: S642.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.16768/j.issn.1004-874X.2021.08.007

摘要

[目的]通过构建冬瓜酵母双杂交cDNA文库,为开展冬瓜基因功能研究提供技术支撑.[方法]以冬瓜高代自交系B227(冬瓜参考基因组测序材料)的根、茎、叶、雄花、嫩果等不同组织为材料,利用CTAB法提取RNA、分离纯化获得mRNA并进行双链cDNA合成和DSN均一化处理后,与pDONR222载体进行BP重组反应,转化大肠杆菌DH10B感受态细胞,构建初级文库;提取初级文库质粒,与pGADT7-DEST载体通过LR重组反应,转化大肠杆菌DH10B感受态细胞,构建酵母杂交cDNA次级文库.利用倍比稀释法计算文库库容量,并通过菌落PCR计算文库重组率和插入片段的大小.[结果]初级文库库容量为8.24×106 CFU,冬瓜均一化酵母双杂交次级cDNA文库库容量为1.03×107 CFU;次级文库中插入片段主要集中在850～3000 bp,重组率为100％,具有良好的多态性.[结论]成功构建了冬瓜均一化酵母双杂交cDNA文库,文库完整性较高、质量较好,符合酵母双杂交实验要求,可应用于后续相关基因产物互作蛋白的筛选等试验,为冬瓜基因功能研究提供前提条件.