基于GII.4型诺如病毒P蛋白的GII型广谱单克隆抗体制备及应用

• 作者: 高珺珊 薛亮 蔡伟程 廖颖茵 左月婷 张菊梅 吴清平
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人源诺如病毒 GII.4型 单克隆抗体 双抗夹心ELISA 检测方法
• 年，卷（期）: 2021,（6）
• 所属期刊栏目: 人类病毒研究论著|Human Virus Articles
• 页码范围: 1317-1325
• 页数: 9页
• 分类号: R373.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.13242/j.cnki.bingduxuebao.003923

摘要

人源诺如病毒(Human noroviruses,HuNoVs)是全球引起急性胃肠炎的重要传染病原.该病毒遗传多样性丰富,包括了5个基因群以及39种基因型,免疫学检测受限.因此,本研究旨在制备广谱性的HuNoV单克隆抗体,并建立可检测多种基因型的双抗体夹心ELISA方法.本研究通过表达纯化流行毒株GII.4型HuNoVs衣壳蛋白P颗粒免疫Balb/c小鼠,筛选出3株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体并进行评价.利用辣根过氧化物酶对抗体进行标记及配对筛选,建立了HuNoVs双抗夹心ELISA检测方法,并进行验证.结果 显示:BI0、1D6、1C1细胞株可分泌广谱性单克隆抗体.所建立的双抗夹心ELISA方法酶标抗体最佳工作浓度为1∶5000,捕获抗体最佳包被浓度为2.0μg/mL,该方法检测GII.4型P颗粒最低检出限为125.0ng/mL,对常见HuNoVsGII.2、GII.3、GII.4、GII.6、GII.17基因型样本均能检出,而与轮状病毒、星状病毒、肠道病毒、札幌病毒无交叉反应.批间与批内重复变异系数均小于7％.临床样本检测结果显示,本方法与荧光定量RT-PCR结果的符合率为84％.本研究成功制备了广谱性的HuNoVs衣壳蛋白单克隆抗体,建立了可应用于HuNoVs流行毒株基因型的双抗夹心ELISA检测方法,为HuNoVs的诊断及流行病学调查提供了一种简便、特异的免疫学方法.