1种布鲁氏菌微滴式数字PCR检测方法的建立

• 作者: 梅力 王英超 程汝佳 于国际 范学政 高晓龙 高敏 秦玉明 李筱英 李巧玲 朱良全 冯小宇
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 关键词: 布鲁氏菌 数字PCR 检测方法
• 年，卷（期）: 2021,（6）
• 所属期刊栏目: 研究简报|RESEARCH NOTES
• 页码范围: 1753-1759
• 页数: 7页
• 分类号: S852.614
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2021.06.030

摘要

本研究旨在构建1种布鲁氏菌(Brucella)微滴式数字PCR方法(droplet digital PCR,ddPCR).以布鲁氏菌BCSP31基因为靶基因,选取保守区域设计引物和探针,构建了布鲁氏菌微滴式数字PCR方法.然后优化了ddPCR反应中的引物、探针浓度及退火温度,并进行方法的灵敏度、特异性和重复性试验.结果 表明,ddPCR的最佳引物和探针浓度分别为900 nmol·L-1和250 nmol·L-1,最佳的退火温度为58℃.ddPCR的线性良好,最低检测下限为1.12 copies·μL-1,与大肠杆菌O:157菌株等其他4种细菌无交叉反应,而且批内重复性和批间重复性都较好.综上表明,本研究建立的ddPCR方法灵敏度高、特异性强,可对布鲁氏菌感染的临床样品进行定量检测.