长链非编码RNA HOXC-AS3调控胶质瘤干细胞微环境内恶变巨噬细胞脂代谢的分子机制研究

• 作者: 盛余敬 董旭宸 姜倩倩 刘亮 李皓然 施佳 李咏东 王利平 张丽 董军
• 来源期刊: 中华神经外科杂志
• 关键词: 神经胶质瘤 增殖 肿瘤侵润 恶变巨噬细胞 脂代谢
• 年，卷（期）: 2021,（7）
• 所属期刊栏目: 基础论著
• 页码范围: 713-720
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn112050-20201128-00595

摘要

目的:探讨胶质瘤干细胞(GSCs)微环境中恶变巨噬细胞(tMΦ)的脂代谢特征及其相关分子调控机制，为靶向tMΦ的精准治疗提供实验依据。方法:实验采用巨噬细胞(MΦ)、tMΦ细胞株(包括tMΦ 1、tMΦ 2)，通过检测细胞内的三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)的水平分析tMΦ的脂代谢特征，采用蛋白质免疫印迹(Western blot)实验检测调控脂代谢的关键分子钙调蛋白(CaM)、载脂蛋白E(ApoE)、激素敏感性三酰甘油脂肪酶(HSL)、肝X受体(LXR)的表达水平。构建tMΦ的差异表达长链非编码RNA(lncRNA)表达谱，选择HOXC-AS3为研究对象。建立HOXC-AS3过表达和低表达的tMΦ细胞株。采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测上调、沉默HOXC-AS3后tMΦ内CaM的表达水平。通过克隆形成实验观察HOXC-AS3沉默后tMΦ的集落形成能力，以Transwell实验检测其侵袭能力，通过建立在体移植瘤小鼠模型观察其致瘤能力。对与HOXC-AS3脂代谢相关的结合蛋白进行蛋白组学分析，应用RNA免疫共沉淀实验验证二者是否可形成复合体，进一步通过qRT-PCR、Western blot实验分析HOXC-AS3对其结合蛋白的调控作用。 结果:tMΦ中的TC、TG含量及CaM、ApoE、HSL、LXR蛋白的表达水平均高于正常MΦ(均 P<0.01)。LncRNA表达谱结果提示，与正常MΦ相比，HOXC-AS3在tMΦ 1、tMΦ 2中均呈高表达。克隆形成实验结果表明，沉默HOXC-AS3后的tMΦ 1、tMΦ 2(sh-HOXC-AS3组)的克隆数目明显少于空转染对照组(sh-NC组)(均 P<0.01)；Transwell实验结果表明，sh-HOXC-AS3组tMΦ 1、tMΦ 2的穿膜细胞数少于sh-NC组(均 P<0.01)；致瘤实验结果表明，sh-HOXC-AS3组小鼠的移植瘤体积均小于sh-NC组(均 P<0.01)。qRT-PCR结果提示，过表达HOXC-AS3可上调tMΦ中CaM的表达，而沉默HOXC-AS3可下调tMΦ中CaM的表达(均 P<0.01)。蛋白组学分析结果提示，与HOXC-AS3相关性最高的脂代谢相关蛋白为hnRNPA1。RNA免疫共沉淀结果证实，hnRNPA1与HOXC-AS3可形成复合体，沉默hnRNPA1后tMΦ内的CaM表达下调(均 P<0.01)，而沉默tMΦ内的HOXC-AS3后，hnRNPA1基因和蛋白水平的变化均无统计学意义(均 P>0.05)。 结论:tMΦ中的脂代谢合成水平高于正常MΦ，其机制可能为HOXC-AS3通过与hnRNPA1的结合，从而影响脂代谢分子CaM的表达，进而调控tMΦ的脂代谢重塑。靶向HOXC-AS3可抑制tMΦ在GSCs微环境的增殖和侵袭，HOXC-AS3可能为提高脑胶质瘤免疫治疗效果的潜在靶点。