微小RNA-296在兔增生性瘢痕中的表达及对人成纤维细胞的作用

• 作者: 郭冰玉 林枫 白泽明 陶凯 王洪一
• 来源期刊: 中华烧伤杂志
• 关键词: 瘢痕 成纤维细胞 转化生长因子β 1 微小RNA
• 年，卷（期）: 2021,（8）
• 所属期刊栏目: 论著·瘢痕治疗
• 页码范围: 725-730
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn501120-20210420-00142

摘要

目的:探讨微小RNA-296（miR-296）在兔增生性瘢痕中的表达及对人成纤维细胞（HFb）的作用。方法:采用实验研究方法。将12只雌雄不限成年新西兰长耳兔按完全随机法分为正常对照组和瘢痕组，每组6只。瘢痕组根据文献制作兔耳增生性瘢痕模型，正常对照组兔不行任何处理。于瘢痕组建模后60 d，采用苏木精-伊红染色法观察2组兔耳瘢痕/皮肤组织中成纤维细胞（Fb）生长与排列，采用实时荧光定量反转录PCR法检测2组兔耳瘢痕/皮肤组织中miR-296和转化生长因子β 1（TGF-β 1）的mRNA表达量，另对miR-296与TGF-β 1mRNA表达量的相关性进行Pearson回归分析。取2批HFb，第1批分为TGF-β 1野生型+miR-296阴性对照组和TGF-β 1野生型+miR-296模拟物组，第2批分为TGF-β 1突变型+miR-296阴性对照组和TGF-β 1突变型+miR-296模拟物组，分别转染对应的序列。转染后48 h，采用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测每组细胞TGF-β 1的荧光素酶和肾荧光素酶的表达，以其比值反映基因表达水平。取2批HFb，每批细胞均分为miR-296阴性对照组和miR-296模拟物组，分别转染对应序列。第1批细胞转染后0（即刻）、12、24、36、48 h，采用噻唑蓝法检测细胞增殖情况。第2批细胞转染后24 h，采用蛋白质印迹法检测细胞中TGF-β 1和Ⅰ型胶原蛋白表达情况。细胞实验中样本数均为3。对数据行析因设计方差分析、独立样本 t检验。 结果:瘢痕组建模后60 d，瘢痕组兔耳瘢痕组织中Fb过度增生且排列紊乱，正常对照组兔耳皮肤组织中Fb生长与排列无异常；瘢痕组兔耳瘢痕组织中miR-296的mRNA表达量（0.65±0.11）显著低于正常对照组兔耳皮肤组织（1.19±0.12， t=5.175， P<0.01），瘢痕组兔耳瘢痕组织中TGF-β 1的mRNA表达量（1.47±0.06）显著高于正常对照组兔耳皮肤组织（1.10±0.03， t=12.410， P<0.01）。Pearson回归分析显示，12只兔耳瘢痕/皮肤组织中miR-296和TGF-β 1的mRNA表达量呈明显负相关（ F=7.278， P<0.05）。转染后48 h，TGF-β 1野生型+miR-296模拟物组细胞TGF-β 1的基因表达明显低于TGF-β 1野生型+miR-296阴性对照组（ t=35.190， P<0.01），2个TGF-β 1突变型组TGF-β 1基因表达相近（ P>0.05）。miR-296模拟物组细胞增殖能力在转染后12、24、36、48 h明显低于miR-296阴性对照组（ t=3.275、11.980、10.460、17.260， P<0.05或 P<0.01）。转染后24 h，miR-296阴性对照组细胞TGF-β 1和Ⅰ型胶原的蛋白表达量均明显高于miR-296模拟物组（ t=3.758、29.390， P<0.05或 P<0.01）。 结论:兔增生性瘢痕中miR-296表达下调，miR-296能够通过下调TGF-β 1的表达抑制HFb的增殖和Ⅰ型胶原蛋白的表达。