环介导恒温扩增结合纳米生物传感器快速检测类鼻疽伯克霍尔德菌的方法及临床应用

• 作者: 王毅 王晓霞 王立程 韩丽梅 李沙 符晓莹 李欢 陈海 朱雄
• 来源期刊: 疾病监测
• 关键词: 类鼻疽伯克霍尔德菌 类鼻疽 环介导恒温扩增 纳米生物传感器 快速诊断
• 年，卷（期）: 2021,（8）
• 所属期刊栏目: 技术与方法|Method and Technology
• 页码范围: 831-836
• 页数: 6页
• 分类号: R211|R378|R446.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3784/jbjc.202108010422

摘要

目的 建立一种环介导恒温扩增(LAMP)结合纳米生物传感器(LFB)快速检测类鼻疽伯克霍尔德菌的快速方法,为临床检测提供依据.方法 针对类鼻疽伯克霍尔德菌的Ⅲ型分泌系统基因设计LAMP特异性引物,建立LAMP方法,通过纳米生物传感判断结果,并应用临床样本对该方法进行评价.结果 LAMP-LFB检测的最佳扩增条件为67℃反应40 min,对类鼻疽伯克霍尔德菌纯培养物DNA灵敏度达到100 fg,对258株菌株进行检测,包括227株类鼻疽伯克霍尔德菌和31株非类鼻疽伯克霍尔德菌,特异性为100％.应用于46个临床样本检测时,与传统分离培养方法相比,达到100％的诊断准确率.LAMP-LFB整个检测过程可在1h内完成,包括15 min DNA制备,40 min LAMP扩增,2 min的LFB结果判读.结论 本研究建立的LAMP-LFB技术是一种快速、灵敏、特异的检测类鼻疽伯克霍尔德菌的方法,可作为类鼻疽基础、现场和临床实验室诊断的潜在工具.