木尔坦棉花曲叶病毒编码4个蛋白的抗血清制备

• 作者: 林丹 林文忠 尚鹏祥 林文武 丁新伦 吴祖建 张洁
• 来源期刊: 福建农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 棉花 木尔坦棉花曲叶病毒 原核表达 免疫印迹 抗血清
• 年，卷（期）: 2021,（11）
• 所属期刊栏目: 植物保护|Plant Protection
• 页码范围: 1359-1364
• 页数: 6页
• 分类号: S432.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.19303/j.issn.1008-0384.2021.11.014

摘要

[目的]对入侵我国的木尔坦棉花曲叶病毒(Cotton leaf curl Multan virus,CLCuMuV)编码的V1、V2、C1和C4蛋白抗血清进行制备,为CLCuMuV的检验检疫及其致病机制的研究奠定基础.[方法]利用原核表达技术对V1、V2、C1和C4蛋白进行IPTG诱导表达,western blot分析表达蛋白的特异性后,V1、V2、C1蛋白免疫新西兰大白兔,C4蛋白免疫小白鼠制备抗血清,利用western blot对抗血清的特异性进行分析.[结果]通过PCR分别扩增V1(768 bp)、V2(363 bp)、C1(1089 bp)和C4(300 bp)目的基因片段,分别连接于原核表达载体后,通过SDS-PAGE和western blot分析分别在34、16、44、13 kDa处存在与预期蛋白大小一致的条带,表明该4种蛋白均成功表达.Western blot分析发现获得的4种抗血清均具有较高的特异性.[结论]成功制备了CLCuMuV V1、V2、C1和C4蛋白的抗血清,可用于后续建立CLCuMuV的检疫方法及研究其致病机制.