组织因子在下肢深静脉血栓动物模型中的表达变化及其作用机制

• 作者: 吴延平 贾广红 刘伟 陈景明 孙英华
• 来源期刊: 中华实验外科杂志
• 关键词: 组织因子 下肢深静脉血栓 组织因子途径抑制物 P选择素 P选择素糖蛋白配体1
• 年，卷（期）: 2021,（5）
• 所属期刊栏目: 血管外科
• 页码范围: 814-819
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn421213-20200713-01236

摘要

目的:构建大鼠下肢深静脉血栓(DVT)模型，探讨组织因子(TF)表达及作用机制。方法:构建TF小干扰RNA(siRNA)特异性沉默TF表达，转染大鼠成纤维细胞RFL-6，反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)实验检测转染效率。通过大鼠尾静脉注射进行动物预处理及分组，72只雄性6～8周龄无特定病原体(SPF)级SD大鼠采用随机数字表法随机分为空白对照组(6只)、假手术组(6只)、模型组(30只)、抑制组(30只)，空白对照组不进行任何处理，假手术组仅进行开腹手术，不结扎静脉，模型组行开腹手术结扎静脉构建DVT模型，抑制组在模型组基础上行TF siRNA预处理。分别于术后2、8、24、48、72 h处死大鼠，取血清样本，RT-PCR实验检测不同组别大鼠血样中TF、组织因子途径抑制物(TFPI)、P选择素(P-selection)及P选择素糖蛋白配体1(PSGL-1) mRNA表达水平；酶联免疫吸附试验检测大鼠血清TF、TFPI、P-selection、PSGL-1表达水平，多组数据间比较采用单因素方差分析，两组数据间均数比较采用SNK- q检验；Spearman检验分析TF与各生物学指标在血栓形成中的关系。 结果:模型组大鼠术后静脉血中TF、TFPI、P-selection、PSGL-1 mRNA表达水平明显高于空白对照组和假手术组大鼠 [TF，1.54±0.12、1.02±0.03、1.03±0.02( t＝11.322， P<0.05)；TFPI，1.47±0.21、1.04±0.03、1.03±0.04( t＝9.382， P<0.05)；P-selection，1.59±0.12、0.95±0.05、1.03±0.03( t＝12.720， P<0.05)；PSGL-1，1.47±0.14、0.96±0.03、1.08±0.04( t＝10.243， P<0.05)]，差异均有统计学意义，模型组大鼠术后静脉血中TF、TFPI、P-selection、PSGL-1表达量均于空白对照组和假手术组大鼠 [TF，(102.42±8.42)、(56.32±5.64)、(52.43±6.32) ng/L( t＝14.230， P<0.05)；TFPI，(42.43±4.45)、(36.43±3.42)、(38.43±4.10) μg/L( t＝10.188， P<0.05)；P-selection，(34.32±4.43)、(21.32±3.24)、(23.43±3.20) μg/L( t＝9.272， P<0.05)；PSGL-1，(1 432.43±110.42)、(832.43±32.43)、(845.43±43.84) μg/L( t＝10.054， P<0.05)]，差异均有统计学意义，且模型组大鼠术后2、8、24 h时静血中TF、TFPI、P-selection、PSGL-1 mRNA表达水平明显高于空白对照组和假手术组大鼠 [TF，1.54±0.12( t＝7.282， P<0.05)，1.61±0.21( t＝6.640， P<0.05)，1.97±0.22( t＝8.022， P<0.05)；TFPI，1.47±0.21( t＝11.022， P<0.05)，1.50±0.18( t＝12.103， P<0.05)，0.52±0.20( t＝11.039， P<0.05)；P-selection，1.59±0.12( t＝11.651， P<0.05)，1.68±0.20( t＝9.022， P<0.05)，2.23±0.31( t＝7.292， P<0.05)；PSGL-1，1.47±0.14( t＝8.023， P<0.05)，1.60±0.23( t＝7.026， P<0.05)，2.20±0.34( t＝8.554， P<0.05)]，模型组大鼠术后2、8、24 h时静血中TF、TFPI、P-selection、PSGL-1表达量也明显高于空白对照组和假手术组大鼠[TF，(102.42±8.42) ng/L( t＝7.166， P<0.05)，(135.43±8.53) ng/L( t＝9.025， P<0.05)，(158.76±22.32) ng/L( t＝12.305， P<0.05)；TFPI，(42.43±4.45) μg/L( t＝15.021， P<0.05)，(51.42±5.43) μg/L( t＝11.353， P<0.05)，(68.64±6.87) μg/L( t＝13.004， P<0.05)；P-selection，(34.32±4.43) μg/L( t＝8.023， P<0.05)，(42.43±5.11) μg/L( t＝12.020， P<0.05)，(59.56±8.31) μg/L( t＝10.266， P<0.05)；PSGL-1，(1432.43±110.42) μg/L( t＝8.102， P<0.05)，(1 544.32±96.43) μg/L( t＝10.442， P<0.05)，(1703.42±117.46) μg/L( t＝9.225， P<0.05)]，差异均有统计学意义，至术后24 h时达最高水平。模型组大鼠术后48 h及72 h静脉血中TF、TFPI、P-selection、PSGL-1 mRNA表达水平出现降低趋势。抑制组大鼠术后2、8、24、48、72 h时静脉血中TF、TFPI、P-selection、PSGL-1 mRNA表达水平明显低于空白对照组及假手术组 [TF，0.43±0.01、0.53±0.01、0.59±0.02、0.61±0.03、0.62±0.01、2.02±0.22、2.02±0.24( t＝14.385， P<0.05)；TFPI，0.45±0.02、0.50±0.02、0.58±0.02、0.60±0.02、0.61±0.03、0.51±0.18、0.50±0.20( t＝13.022， P<0.05)；P-selection，0.34±0.03、0.55±0.03、0.67±0.04、0.60±0.02、0.55±0.03、2.02±0.16、1.79±0.14( t＝15.335， P<0.05)；PSGL-1，0.40±0.02、0.54±0.02、0.71±0.04、0.62±0.03、0.57±0.03、1.84±0.16、1.65±0.15( t＝10.283， P<0.05)]，差异均有统计学意义，抑制组大鼠术后2、8、24、48、72 h时静脉血中TF、TFPI、P-selection、PSGL-1表达量明显低于空白对照组及假手术组 [TF，(34.64±5.64)、(50.53±10.54)、(65.43±11.42)、(48.42±12.42)、(38.42±10.24)、(102.32±7.43)、(93.43±6.48) ng/L( t＝12.473， P<0.05)；TFPI，(21.42±9.40)、(29.42±6.75)、(37.53±5.48)、(32.43±10.48)、(24.54±6.63)、(57.65±6.40)、(53.23±4.30) μg/L( t＝11.255， P<0.05)；P-selection，(13.42±2.23)、(15.54±3.02)、(18.76±2.43)、(15.43±1.43)、(11.43±2.03)、(43.43±5.03)、(37.65±5.11) μg/L( t＝12.336， P<0.05)；PSGL-1，(588.54±98.53)、(645.32±103.42)、(785.54±120.32)、(677.76±124.43)、(544.65±109.43)、(1 343.53±75.43)、(1 197.32±89.32) μg/L( t＝8.102， P<0.05)]，差异均有统计学意义，抑制组大鼠术后2、8、24 h时各观察指标呈增长趋势，至术后24 h时达最高水平，但静脉血中P-selection、PSGL-1 mRNA表达水平和TF、TFPI、P-selection、PSGL-1表达量均呈现降低表现。相关性分析结果显示，DVT模型中，大鼠静脉血中TF表达水平与TFPI( r＝0.632， P<0.05)、P-selection( r＝0.513， P<0.05)、PSGL-1( r＝0.651， P<0.05)呈明显正相关。 结论:大鼠DVT模型静脉血中，TF、TFPI、P-selection、PSGL-1表达量与血栓形成进程有关，TF表达与TFPI、P-selection、PSGL-1表达存在正相关，P-selection、PSGL-1可通过介导内皮细胞黏附影响TF表达，调节血栓形成。