兔出血症病毒2型TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 陈萌萌 仇汝龙 范志宇 胡波 宋艳华 魏后军 朱伟峰 徐为中 王芳
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 兔出血症病毒2型 TaqMan探针 荧光定量RT-PCR 敏感性 特异性
• 年，卷（期）: 2021,（6）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖|ANIMAL HUSBANDRY AND VETERINARY SCIENCES·AQUICULTURE
• 页码范围: 1476-1480
• 页数: 5页
• 分类号: S855.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2021.06.015

摘要

以新发生的兔出血症病毒2型(RHDV2)SC2020/04株VP60基因序列为参考,设计出1对特异性引物和TaqMan探针,建立了一种快速、灵敏且特异的用于检测新型病毒的荧光定量RT-PCR检测方法.试验结果显示:本研究建立的方法,标准曲线线性关系良好,R2值达到0.999;其特异性较好,与兔出血症病毒1型(RHDV1)、仙台病毒(SV)和轮状病毒(RRV)病原均无交叉反应;灵敏性高,最低检出量为1μl 1×10拷贝;且重复性良好,批内和批间试验的变异系数平均值均小于2％.临床检测结果表明,利用该方法对108份临床病料进行检测,检出RHDV2阳性样品72份,检出率为66.7％,明显高于常规的RT-PCR方法(62.0％).结果证明,新建立的TaqMan荧光定量RT-PCR方法适合于RHDV2感染的特异性诊断.