基于SPR技术定量检测肾透明细胞癌组织中NHERF3蛋白水平

• 作者: 杨颖 胡家 张悦
• 来源期刊: 山西医科大学学报
• 关键词: 表面等离子共振技术 PDZ蛋白 NHERF3 肾癌 无标记定量检测
• 年，卷（期）: 2021,（8）
• 所属期刊栏目: 方法与技术|Methods and Techniques
• 页码范围: 1085-1090
• 页数: 6页
• 分类号: R318
• 语种: 中文
• DOI: 10.13753/j.issn.1007-6611.2021.08.025

摘要

目的 建立基于表面等离子共振(SPR)技术定量检测肾透明细胞癌组织中钠氢交换调控因子NHERF3蛋白水平的方法.方法 将抗NHERF3抗体固定在CM5芯片,将重组NHERF3蛋白(0.78-50 nmol/L)和牛血清白蛋白BSA(3.125-100μmol/L)依次注入芯片表面,通过Biacore分析软件计算NHERF3与其抗体的亲和力.将NHERF3蛋白(0.0625-8μg/ml)依次注入高水平固定抗NHERF3抗体的芯片表面,用结合反应值通过非线性回归法建立NHERF3的标准曲线.将NHERF3蛋白稀释至8μg/ml,重复进样50次,检测方法的可重复性.将20对肾癌和癌旁组织蛋白提取液作为分析物,根据反应值计算NHERF3的浓度并比较肾癌和癌旁组织之间的差异.结果 抗NHERF3抗体与NHERF3之间可以发生特异性强相互作用(KD=19.7 nmol/L).该NHERF3定量检测方法的检测限(LOD)和定量限(LOQ)分别为8.12 ng/ml和27.07 ng/ml;50次重复检测的变异系数(CV)为4.25％.肾透明细胞癌组织中NHERF3蛋白的表达水平明显低于癌旁组织[(36.4±54.38)ng/μl vs(155.1±60.47)ng/μl,P<0.001].结论 基于SPR的定量检测方法适用于高通量检测肾透明细胞癌组织中NHERF3的蛋白表达水平.