牛病毒性腹泻病毒两种基因型双重RT-PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 王勤 何博 欧云文 刘俐君 杨磊 潘琴 张杰
• 来源期刊: 动物医学进展
• 关键词: 牛病毒性腹泻病毒1型 牛病毒性腹泻病毒2型 双重反转录-聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2021,（9）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 24-29
• 页数: 6页
• 分类号: S852659.6|S858.23
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2021.09.005

摘要

为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)双重RT-PCR检测方法,根据BVDV-1 (AF091605.1、KF501393.1、MK204904.1、MN513404.1和MG923683.1)和BVDV-2 (AF502399.1、MG436782.1、AF145969.1、KC176777.1和MN513411.1)流行毒株5'-UTR保守序列设计2对特异性引物,通过优化反应条件,建立可同时检测BVDV-1和BVDV-2的双重RT-PCR方法.结果 显示,该检测方法重复性好、特异性强,可分别检测出BVDV-1和BVDV-2核酸,与牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCV)、牛副流感病毒3型(BPIV-3)、猪瘟病毒(CSFV)均不发生交叉反应;最低检测量为1×103拷贝/μL和1×102拷贝/μL;对达州及周边地区的332份临床样品进行检测,结果表明,该地区BVDV-1阳性率为7.83％,BVDV-2阳性率为0.90％,未检出BVDV-1和BVDV-2混合感染的临床样品.综上所述,建立的双重RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性、重复性和临床适用性,可用于BVDV的临床诊断和分子流行病学调查.