水稻CRISPR/Cas12a系统的优化及其介导的腺嘌呤碱基编辑器的建立

• 作者: 王敬文 严芳 柳浪 周雪平 王道文 周焕斌
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: CRISPR Cas12a 腺嘌吟碱基编辑器 水稻
• 年，卷（期）: 2021,（6）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 279-285
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2021-0231

摘要

为了构建高效的CRISPR/Cas12a介导的水稻基因编辑系统,通过测试不同来源的Cas12a蛋白、crRNA长度和构型来探索影响Cas12a编辑活性的因素发现,相对于AsCas12a和LbCas12a在crRNA为23 nt时具有更高的编辑效率,并且crRNA 3'端的U4AU4结构并不能增强其在水稻中的编辑活性,同时利用大肠杆菌腺嘌吟脱氨酶变体TadA8e开发了 CRISPR/LbCas12a介导的腺嘌吟碱基编辑系统pUbi:rBE58,成功地将水稻内源基因OsCPK15实现A到G替换(A＞G),其效率为33.33％.本研究证明了利用CRISPR/Cas12a可以对水稻基因组进行编辑,丰富了水稻基因编辑工具,拓宽了基因编辑工具箱.