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白细胞抗原糖基化位点突变质粒载体构建及表达
白细胞抗原糖基化位点突变质粒载体构建及表达
作者:
周晓曼
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
主要组织相容性复合体
白细胞抗原
糖基化位点
突变
蛋白表达
摘要:
目的 构建白细胞抗原C(HLA-C)基因糖基化位点突变质粒,初步探讨HLA-C分子糖基化修饰对HLA-C功能的影响.方法 利用聚合酶链式反应(PCR)方法扩增出HLA-C基因以及HLA-C糖基化位点突变基因,回收后的基因经双酶切后连接到PCMV-Flag真核表达载体上,构建成功的质粒转染进人胚肾细胞(293T)表达HLA-C蛋白以及糖基化突变HLA-C蛋白,并用蛋白免疫印迹方法进行鉴定.将鉴定正确的HLA-C和HLA-C糖基化位点突变的基因连接到带有红色荧光的载体上,并转染进293T细胞,进行免疫荧光实验,观察蛋白在细胞中表达情况.结果 琼脂糖凝胶电泳显示,成功扩增出HLA-C基因和HLA-C突变基因;蛋白免疫印迹结果显示成功表达HLA-C蛋白和HLA-C糖基化突变的蛋白;激光共聚焦结果显示,正常的HLA-C蛋白主要表达在胞质和膜周,而糖基化突变后,HLA-C大部分表达在胞质中.结论 成功构建HLA-C质粒以及糖基化位点突变的质粒载体.本实验结果为进一步研究HLA-C类分子糖基化修饰提供了基础和思路.
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篇名
白细胞抗原糖基化位点突变质粒载体构建及表达
来源期刊
中国当代医药
学科
关键词
主要组织相容性复合体
白细胞抗原
糖基化位点
突变
蛋白表达
年,卷(期)
2021,(12)
所属期刊栏目
论著
研究方向
页码范围
30-33,封3
页数
5页
分类号
R786
字数
语种
中文
DOI
10.3969/j.issn.1674-4721.2021.12.008
五维指标
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主要组织相容性复合体
白细胞抗原
糖基化位点
突变
蛋白表达
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
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期刊影响力
中国当代医药
主办单位:
中国保健协会
当代创新(北京)医药科学研究院
出版周期:
旬刊
ISSN:
1674-4721
CN:
11-5786/R
开本:
大16开
出版地:
北京市朝阳区东四环中路78号楼(大成国际中心B1座)8B02室
邮发代号:
2-515
创刊时间:
2008
语种:
chi
出版文献量(篇)
38911
总下载数(次)
29
总被引数(次)
152818
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