内源性一氧化氮对血管内皮细胞超氧化物歧化酶1活性及细胞凋亡的影响

• 作者: 张再丰 王秀丽 张赏月 田小雨 张璐璐 杜军保 金红芳 黄娅茜
• 来源期刊: 中华实用儿科临床杂志
• 关键词: 内源性一氧化氮 超氧化物歧化酶 人脐静脉内皮细胞 凋亡
• 年，卷（期）: 2021,（15）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1176-1180
• 页数: 5页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn101070-20210517-00545

摘要

目的:探讨内源性一氧化氮(NO)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)超氧化物歧化酶1(SOD1)活性及内皮细胞凋亡的调节作用。方法:以HUVECs为研究对象，采用内皮型一氧化氮合酶(eNOS)短发夹RNA (shRNA)慢病毒转染对内皮细胞eNOS进行敲低，HUVECs分为4组：空载体组(scramble)、转染eNOS shRNA组(eNOS shRNA)、转染eNOS shRNA+硝普钠(SNP)组(eNOS shRNA+SNP)及转染eNOS shRNA+SNP+三(2-羧乙基)膦盐酸盐(TCEP)组(eNOS shRNA+SNP+TCEP)。采用Western blot法检测eNOS蛋白表达和SOD1二聚体/单体蛋白表达，采用酶联免疫吸附法检测SOD酶活性，采用NO荧光探针法检测内皮细胞NO水平，采用二氢乙锭(DHE)检测内皮细胞超氧化物阴离子水平，采用原位末端转移酶标记技术检测内皮细胞凋亡情况。结果:与空载体组相比，eNOS shRNA组中内源性NO水平(2.690±0.420比15.029±2.193， P<0.01)、eNOS蛋白表达(1.000±0.778比3.141±0.199， P<0.01)、SOD1二聚体/单体比例(4.6±1.0比7.6±2.0， P<0.05)和SOD活性[(0.432±0.254) Carmen′s unit/10 4 cell比(1.000±0.116) Carmen′s unit/10 4 cell， P<0.01]均显著降低，细胞内超氧阴离子水平(11.180±1.560比6.146±1.007， P<0.01)和HUVECs凋亡水平[75.0(55.0，100.0)%比0(0，0)%， P<0.01]均显著增加。与eNOS shRNA组相比，eNOS shRNA+SNP组中内源性NO含量(16.705±0.116比2.690±0.420， P<0.01)、SOD1二聚体/单体比例(7.3±2.0比4.6±1.0， P<0.05)和SOD活性[(0.737±0.060) Carmen′s unit/10 4 cell比(0.432±0.254) Carmen′s unit/10 4 cell， P<0.05]均显著增加，细胞内超氧阴离子水平(6.897±1.648比11.180±1.560， P<0.01)和HUVECs凋亡水平[0(0，0)%比75.0(55.0，100.0)%， P<0.01]均显著下降。与eNOS shRNA+SNP组相比，eNOS shRNA+SNP+TCEP组中SOD1二聚体/单体比例(4.4±0.9比7.3±2.0， P<0.05)和SOD活性[(0.214±0.084) Carmen′s unit/10 4 cell比(0.737±0.060) Carmen′s unit/10 4 cell， P<0.01]均显著降低，超氧阴离子水平(10.917±1.552比6.897±1.640， P<0.01)和HUVECs凋亡水平[63.6(55.0，90.0)%比0(0，0)%， P<0.01]均显著增加；但NO水平(16.112±0.926比16.705±0.116， P>0.05)无明显变化。 结论:内源性NO通过上调SOD1二聚体/单体比例，增强SOD活性，抑制活性氧积累，从而有效对抗人脐静脉内皮细胞凋亡。