猪RNase L与PRRSV nsp4缺失突变体的构建及其互作研究

• 作者: 于莹 李均同 丛晓燕 齐静 刘思当 郑乾坤 孙文博 王爱国 郑龙祥 吴香菊 杜以军 单虎
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征症 猪核糖核酸内切酶L 非结构蛋白4 免疫共沉淀
• 年，卷（期）: 2021,（11）
• 所属期刊栏目: 预防兽医|PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
• 页码范围: 85-92
• 页数: 8页
• 分类号: S885.3
• 语种: 中文

摘要

RNase L是一种独特的核糖核酸内切酶,在机体的抗病毒过程中发挥重要作用.猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白4(nsp4)具有3C样丝氨酸蛋白酶活性,是参与病毒多聚蛋白前体切割的主要蛋白酶,是影响病毒粒子成熟的重要蛋白.课题组前期研究发现猪RNase L(sRNaseL)能够与nsp4互作发挥抗PRRSV作用.为了筛选sRNase L与nsp4互作的区段或位点,本研究分别构建了sRNase L与nsp4的截短体或突变体,通过免疫共沉淀试验进行筛选,结果显示突变体sRNaseL R460A、sRNase L R675A、sRNase L Y720A、sRNaseL F724A都能够与nsp4发生互作,只有缺失体sRNaseL 1～ 586aa不与nsp4互作,表明sRNaseL第3结构域(587～744aa)为与nsp4互作区段,但该区段不包括第675位精氨酸、第720位酪氨酸、第724位苯丙氨酸;分别包含nsp4三个结构域的截短体nsp4-D1(1～80aa)、nsp4-D2(60～156 aa)、nsp4-D3(157 ～ 204aa)中,只有nsp4-D1与sRNaseL发生互作,表明nsp4的1～60 aa为与sRNase L互作区段.本研究为进一步探究sRNase L与nsp4互作抗PRRSV机制奠定了基础,为预防和控制PRRSV感染提供了新的思路和方法.