Mechlppdk基因在木薯中的表达分析及RNA干扰载体构建和遗传转化

• 作者: 王海燕 陈新 周新成 沈旭 孔华 王文泉
• 来源期刊: 中国农学通报
• 关键词: 丙酮酸磷酸双激酶 表达谱 RNA干扰 表达载体 木薯 遗传转化 脆性愈伤 转基因苗 PCR鉴定
• 年，卷（期）: 2021,（17）
• 所属期刊栏目: 生物科学
• 页码范围: 19-25
• 页数: 7页
• 分类号: S533
• 语种: 中文

摘要

本研究为了明确丙酮酸磷酸双激酶(ppdk)在木薯中的表达谱,创制Mechlppdk的干扰株系,以期为Mechlppdk的功能研究提供材料.本研究以栽培型木薯Arg7为材料,用qPCR的方法分析Mechlppdk在木薯根、茎、叶中的表达谱;采用RNA干扰的方法,构建Mechlppdk的干扰载体,并遗传转化木薯脆性愈伤,经木薯再生体系获得转基因苗,在添加抗生素的培养基上进行生根筛选,经PCR鉴定获得Mechlppdk的干扰株系.用qPCR的方法鉴定Mechlppdk在干扰株系的表达情况.结果 表明,Mechlppdk在木薯叶片中表达量最高,达到管家基因的50％.在Mechlppdk的转运肽区,选取1个保守区段设计引物,构建RNA干扰表达载体pART27-echlppdki,将表达载体转化农杆菌LBA4404,侵染木薯脆性胚愈伤,获得阳性转基因木薯苗7个株系.通过qPCR分析发现各株系Mechlppdk转录本有不同程度的降低.通过以上分析表明本研究获得了干扰效率较高木薯Mechlppdk干扰株系,将为解析木薯Mechlppdk的功能提供研究材料.