猪树突状细胞表面分子CD103的表达及其抗血清的制备

• 作者: 张韬 付钰广 李宝玉 王金泉 刘光亮
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 树突状细胞 CD103蛋白 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2021,（12）
• 所属期刊栏目: 预防兽医|PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
• 页码范围: 85-91
• 页数: 7页
• 分类号: S855.3
• 语种: 中文

摘要

为制备抗猪树突状细胞表面分子CD103蛋白的多克隆抗体,首先从NCBI基因库中获取查找猪源CD103的基因序列,并设计引物;其次,采集猪呼吸道淋巴结样品,提取RNA反转录为cDNA,通过PCR的方法扩增得到CD103基因片段;然后将所获扩增的CD103基因克隆入原核表达载体pET-30a(+)并构建表达重组质粒pET-30a-CD103,将构建的重组质粒转化入BL21 (DE3)感受态细胞,利用IPTG诱导蛋白表达,用NI-NTA亲和层析的方法纯化目的 蛋白;最后,将纯化的目的 蛋白与ISA206佐剂混合乳化后通过背部皮下免疫途径免疫BALB/c小鼠,经3次加强免疫后收集血清获得多克隆抗体.利用ELISA、Western blot和间接免疫荧光(IFA)试验评价制备的多克隆抗体的效价和反应性.结果 表明,本研究成功扩增得到猪CD103基因并成功构建重组表达质粒;利用原核表达系统成功表达了猪CD103目的 蛋白.Western blot以及IFA结果显示,本研究制备的多克隆抗体特异性高,能与CD103蛋白发生特异性结合;经ELISA滴定结果显示,制备的多克隆抗体在稀释至1∶25600倍时依旧具有良好的反应性.综上表明,本研究成功制备抗猪CD103蛋白多克隆抗体,为后期制备抗CD103单克隆抗体及研究黏膜免疫过程中CD103阳性树突状细胞的相关研究奠定了基础.