何首乌实时荧光定量PCR内参基因筛选

• 作者: 王浩 蔡启忠 刘露 杨全 周良云
• 来源期刊: 中国中药杂志
• 关键词: 何首乌 内参基因 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 分子生药学
• 页码范围: 80-85
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.19540/j.cnki.cjcmm.20201024.103

摘要

为筛选适宜何首乌Polygonum multiflorum不同组织基因表达分析的内参基因,从何首乌转录组数据中选取Actin,GAP-DH,SAND,PP2A,TIP41常用的5个候选内参基因,设计特异性引物.通过实时荧光定量PCR,利用geNorm,NormFinder,BestKesper,Delta CT以及RefFinder等方法对5个候选内参基因在何首乌不同组织中的表达稳定性进行分析,为何首乌基因差异表达研究提供可靠的内参基因,以确保分析结果的可靠性.结果 表明,各候选内参基因在何首乌不同组织中表达水平和稳定性有较大差异,其中对各候选内参基因的表达水平(Ct)的分布分析显示,以Actin和GAPDH基因在各组织中表达水平相对较高,而SAND,PP2A,TIP41表达水平较低;通过不同方法对各候选内参基因稳定性进行分析,geNorm分析结果以PP2A,GAPDH表达最为稳定,SAND表达稳定性最差,NormFinder和Delta CT法均以PP24稳定性最高,SAND稳定性最低,而BestKeeper分析以Actin最稳定.通过RefFinder对候选基因稳定性进行综合评价分析得出以PP2A基因稳定性最高,其后依次为GAPDH,Actin,TIP41,SAND,以SAND基因稳定性最差.因此,PP2A基因为何首乌不同组织基因表达分析比较理想的内参基因.