叶用莴苣无缝克隆构建LsE3基因过表达载体和新RNAi载体及遗传转化体系优化

• 作者: 王婷甄 孙燕川 唐文琨 范双喜 郝敬虹
• 来源期刊: 中国农学通报
• 关键词: 叶用莴苣 高温抽薹 LsE3泛素连接酶 沉默载体 载体构建 过表达 RNAi 遗传转化
• 年，卷（期）: 2021,（11）
• 所属期刊栏目: 生物科学
• 页码范围: 15-23
• 页数: 9页
• 分类号: S636.2
• 语种: 中文

摘要

研究旨在应用新技术和新载体构建过表达和沉默载体,优化遗传转化体系,验证生菜LsE3基因功能,探究高温抽薹机制.以pCAMBIA1304和pFGC5941载体为材料,通过无缝克隆构建叶用莴苣转基因载体,并通过筛选培养基配方优化遗传转化体系.试验成功地以pCAMBIA1304为基础,插入源自pFGC5941的dsRNA表达框序列,获得了新RNAi空载pCAMBIA 1304-FGC5941,构建了LsE3沉默载体,并成功以双元质粒载体pCAMBIA1304构建了LsE过表达载体.试验对易抽薹叶用莴苣品种'GB-31'进行潮霉素浓度、直接芽诱导培养基配方和生根培养基配方的筛选,确立了潮霉素适宜筛选浓度为5 mg/L,并确立了最优培养芽诱导和生根培养基配方.试验成功获得新RNAi空载并构建了转基因载体,优化了遗传转化体系,为解决载体构建繁琐复杂的问题提供新思路,并奠定了生菜转基因技术的基础.