活细胞定量FRET成像方法鲁棒性评估

• 作者: 尹傲 翟士贤 孙晗 刘智 庄正飞 陈同生
• 来源期刊: 中国激光
• 学科: 生物学
• 关键词: 光谱学 荧光共振能量转移(FRET) 定量FRET测量 活细胞 光谱线性分离 鲁棒性
• 年，卷（期）: 2021,（21）
• 所属期刊栏目: 生物医学光子学与激光医学|Biomedical Photonics and Laser Medicine
• 页码范围: 97-110
• 页数: 14页
• 分类号: Q631
• 语种: 中文
• DOI: 10.3788/CJL202148.2107001

摘要

基于受体敏化的3-cube(通道)荧光共振能量转移(FRET)成像方法(通常称为E-FRET方法)是活细胞定量FRET检测中主流的成像分析技术.基于激发发射光谱线性分离的定量FRET检测方法(mExEm-spFRET)因天然地克服光谱串扰的能力,在活细胞定量FRET检测中具备非常好的鲁棒性.利用表达不同模型质粒的乳腺癌MCF-7活细胞,在不同信噪比(RsN)的条件下分别进行了定量E-FRET和mExEm-spFRET测量,以FRET效率(E)和质粒供受体浓度比(RC)参量作为指标,评估二种方法的鲁棒性.对于RSN＞3的细胞,两种方法得到一致的E值,但是E-FRET方法得到的个别质粒Rc值偏小;对于RsN＜3的细胞,两种方法都能得到一致的Rc值,但是E-FRET方法得到的个别质粒E值误差率大于0.1,与文献值偏差稍大.E-FRET与mExEm-spFRET具有几乎一致的活细胞定量FRET检测能力,但是mExEm-spFRET的鲁棒性优于E-FRET方法.