忍冬藤提取物诱导骨肉瘤细胞凋亡的作用及机制研究

• 作者: 严宝飞 段金廒 张景正 刘圣金 刘嘉 毛艺蓓 曾庆琪
• 来源期刊: 中草药
• 关键词: 忍冬藤 骨肉瘤 凋亡 作用机制 UPLC-Q-TOF/MS
• 年，卷（期）: 2021,（13）
• 所属期刊栏目: 药理与临床|Pharmacological Studies and Clinical Observations
• 页码范围: 3923-3932
• 页数: 10页
• 分类号: R285.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2021.13.016

摘要

目的 研究忍冬藤Lonicera japonica提取物对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的作用及机制.方法 采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF/MS)表征忍冬藤提取物的化学成分:采用MTT法检测忍冬藤提取物对人骨肉瘤细胞HOS、143B以及人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2存活率的影响;采用荧光显微镜观察忍冬藤提取物对HOS、143B细胞凋亡的影响;采用Annexin V/PI双染法检测忍冬藤提取物对HOS细胞凋亡的影响;采用JC-1染色法检测忍冬藤提取物对HOS细胞线粒体膜电位的影响;采用Western blotting法检测忍冬藤提取物对HOS细胞B细胞淋巴瘤2相关X蛋白(bcl-2 associated X,Bax)、B 细胞淋巴瘤2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)、活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、活化的多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved poly ADP-ribose polymerases,cleaved PARP)、cleaved Caspase-9和细胞色素 C(cytochrome-c,Cyt-C)蛋白表达的影响.结果 忍冬藤提取物中鉴定出有机酸类、三萜皂苷类、黄酮类、环烯醚萜类和氨基酸类5种类型的36种化学成分.忍冬藤提取物抑制HOS和143B细胞存活率,显著诱导HOS细胞凋亡(P＜0.01),Caspase-3抑制剂Z-VAD-FMK显著抑制忍冬藤提取物诱导的HOS细胞凋亡(P＜0.05、0.01);忍冬藤提取物显著提高HOS细胞Caspase-3活性(P＜0.01),显著改变HOS细胞线粒体膜电位(P＜0.05、0.01),显著上调HOS细胞Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP、cleaved Caspase-9、Cyt-C 和 Bax/Bcl-2蛋白表达水平(P＜0.05、0.01),显著下调 Bcl-2蛋白表达水平(P＜0.05、0.01).结论 忍冬藤提取物能够抑制骨肉瘤细胞增殖,并通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达,上调 Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP、cleaved Caspase-9和 Cyt-C 蛋白表达,激活 Caspase 级联反应有关.