抑制着丝粒蛋白M通过抑制细胞炎症及凋亡缓解转化生长因子-β诱导的胶原蛋白沉积

• 作者: 杨康 余伟民 阮远 程帆 葛名欢
• 来源期刊: 中华实验外科杂志
• 关键词: 肾纤维化 核因子-κB 凋亡
• 年，卷（期）: 2021,（9）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1728-1732
• 页数: 5页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn421213-20210113-01022

摘要

目的:利用体外模型探讨着丝粒蛋白M(CENPM)对肾纤维化的影响及其机制。方法:体外培养人源肾小管上皮细胞(HK-2)，先用0、10、20、50 ng/ml的转化生长因子-β(TGF-β) HK-2 24 h，利用蛋白质印迹法(Western blot)和细胞免疫荧光检测CENPM蛋白表达；倒置显微镜观察HK-2细胞形态变化。随后利用腺病毒载体构建sh-CENPM病毒转染HK-2细胞，将细胞分为3组：短发卡RNA(shRNA)空白载体组；shRNA+TGF-β组(TGF-β 50 ng/ml处理24 h)；sh-CENPM+TGF-β组(sh-CENPM腺病毒转染+TGF-β处理)。利用细胞免疫荧光检测Fibronectin(Fn)表达，Western blot检测胶原蛋白、核因子-κB(NF-κB)通路相关蛋白及凋亡蛋白表达；同时酶联免疫吸附试验(ELISA)检测NF-κB下游白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度变化；流式细胞术检测3组细胞内活性氧(ROS)水平。两组间比较采用 t检验。 结果:50 ng/ml TGF-β处理24 h后CENPM表达量显著升高(2.85±0.32比1.00±0.01， t＝9.803， P<0.01)，且HK-2细胞形态由卵圆形变为长梭形。与shRNA+TGF-β组比较，利用sh-CENPM腺病毒抑制CENPM表达后，能明显减少TGF-β诱导的Fn及COL-I的表达(1.74±0.27比2.37±0.21， t＝2.635， P<0.05；1.98±0.34比3.23±0.26， t＝2.477， P<0.05)，且抑制NF-κB信号通路的激活，减少下游IL-1β(144.23±18比297.45±41.63， t＝6.278， P<0.01)、IL-6(197.46±27.51比378.43±41.22， t＝7.954， P<0.01)和TNF-α(311.42±31.57比557.38±49.34， t＝10.290， P<0.05)的生成，缓解细胞内ROS的产生及细胞凋亡。 结论:抑制CENPM能够通过反向调节肾小管上皮细胞内的炎性反应及细胞凋亡，减缓肾纤维化的发展。