阴沟肠杆菌乳酸脱氢酶基因缺失突变株的构建及其生物学特性

• 作者: 石会玲 周宇航 何平 黄蒙蒙 邵帅 葛菁萍 凌宏志
• 来源期刊: 中国农学通报
• 关键词: 阴沟肠杆菌 乳酸脱氢酶 自杀质粒 同源重组 基因敲除
• 年，卷（期）: 2021,（23）
• 所属期刊栏目: 生物科学
• 页码范围: 29-37
• 页数: 9页
• 分类号: S182
• 语种: 中文

摘要

旨在应用自杀质粒重组技术,构建阴沟肠杆菌乳酸脱氢酶突变株,为进一步提高乙偶姻的产量和扩大菌株选择范围奠定基础.利用双酶切的方法将同源片段插入到自杀质粒pKR6K中,构建出ldh基因敲除质粒,然后利用细菌接合的方法敲除E.cloacae的ldh基因.成功克隆出两段E.cloacae乳酸脱氢酶基因的同源序列,长度分别为526 bp,通过序列比对分析,E.cloacae乳酸脱氢酶基因序列相似性为100％.通过对E.cloacae进行乳酸脱氢酶基因的敲除,成功构建一株ldh缺失重组菌株E.cloacae △ ldh,同时2,3-丁二醇提高6.8％,乙酸提高了 24.3％.E.cloacae乳酸脱氢酶缺失工程菌株构建成功,对利用微生物法工业化生产乙偶姻奠定基础.